何为PCR，说明其原理及其应用

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  yuzmzz 2011-11-21 00:00:00

  特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术

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  CH68453622 2011-11-21 00:00:00

  聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ，PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引 物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。 定点诱变：设计引物时对引物进行修改，使其在某些位点上与扩增模板不相配对，但是又不影响引物与模板的退火，这种引物扩增后的到的产物就是在这些不配对区发生了定点突变。 分子标记的鉴别：RAPD扩增的片断是引物之间的区域，不同个体引物之间的序列长度不同，可以作为物种或个体的一种标记，这是分子水平的标记，也称分子标记。 基因克隆：反向PCR。

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