酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理是什么？

　　ELISA检测试剂盒试验需恪守的原理

　　ELISA检测试剂盒的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

　　ELISA检测试剂盒可以用于：(1)检测大分子抗原和特异性抗体等;(2)具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

　　ELISA检测试剂盒实验中的血清需采用血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000xg离心15分钟左右，收集上清，分装后，标好号，-20°C或-80°C保存。运输是用干冰。

　　把ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。对于一个旨在分离CD4阳性T的试剂盒来说，操作流程主要有以下几步。首先，将样品与anti-CD4抗体包被的磁珠共同孵育，使抗体与CD4+T结合。然后洗去不需要的非目标(即不表达CD4的)，留下磁珠-抗体-复合物。将上述复合物与能结合anti-CD4抗体的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗体-二抗复合物。我们可以用磁铁去除这种磁珠-抗体-二抗复合物，而所有的CD4+细胞留在上清中。ZH，只需将上清转移就可以进行下游研究了。

　　ELISA检测试剂盒试验有必要恪守以下3个ZX原理：

　　(1)抗原或抗体能吸附于固相载体表面，并坚持其免疫学活性;

　　(2)抗原或抗体可通过共价键与酶衔接构成酶结合物，而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性;

　　(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可依据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在，并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，ELISA检测试剂盒可依据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出未知样品中抗体或抗原的浓度。

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