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- 苍飒飒之赵永 2017-04-27 00:00:00
- 透射电镜生物样品制备步骤 生物样品, 透射电镜, 制备步骤 一.取材: 组织块小于1立方毫米 二.固定: 2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。 用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次 1%锇酸固定液固定 2-3小时 用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次 三.脱水: 50%乙醇 15-20分 70%乙醇 15-20分 90%乙醇 15-20分 90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分 90%丙酮 15-20分 以上在4度冰箱内进行 丙酮 室温 15-20分三次 四.包埋: 纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时 纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜 纯包埋液 37度 2-3小时 五.固化: 37度烘箱内 过夜 45度烘箱内 12小时 60度烘箱内 24小时 六.超薄切片机切片 50-60 nm 七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色 八.透射电镜观察。拍片 由于生物样品含水太多,在电镜中会被真空蒸发掉从而破坏了结构,所以需要一些能够把水温和取代掉、并且自身没有结构的物质,这就是树脂包埋剂。正因为生物脆弱、结构容易破坏,所以才需要温和的制样方法,方法才这么复杂。生物电镜制样就是Z主要的工作,看电镜倒是次要的。以下是生物样品超薄切片的流程图:
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