为什么内心会比表面脆弱得多…？

荧光，在生物实验领域是一种很常见的工具，在实验室应用方便且用途广泛，无论是定性还是定量，计数还是成像，荧光相关实验都能满足需求。一台操作便捷、清晰跟手的荧光显微镜往往比高端仪器赢得的Respect更多。荧光可以为细胞实验做些什么？它的工作原理又是什么？一起来看！

一、什么是荧光

荧光是激发态分子不通过内部转换方式消耗能量回到基态，而是释放出相应较低能量的光量子。

荧光物质都具有两种特征光谱：激发光谱和发射光谱。不同荧光物质有其最敏感而有效的激发波长，因而选择合适的激发/发射光谱以获得ZJ的结果，是实验中首要考虑的问题。在研究中常见的荧光相关参数都是相对应的，比如AO-DNA(500/526)、AO-RNA(460/650)、PI(535/615)、DAPI(359/461)、FITC(493/517)以及GFP(498/516)等。

二、荧光在细胞实验中的应用

• 荧光染色计数

细胞实验中，荧光的应用频率可以说是很高的，只要涉及有关量的细胞实验，就需要细胞计数。常规的活细胞计数法，推荐使用台盼蓝染色。但在培养原代细胞或分离PBMC时，残留的RBC被台盼蓝拒染，无核细胞的干扰会影响整体的结果判定。而AO/PI染色计数便能解决这一问题！

AO具有膜通透性，可以通过完整细胞膜，使核DNA和RNA染色，同时在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的凋亡小体，AO使其染上黄绿色荧光，坏死的细胞黄荧光减弱甚至消失，呈现细胞核碎裂点状大小不一、质密浓染。

PI无膜通透性，只能通过不完整的细胞膜，因此只能使所有死细胞的细胞核呈现红色荧光。

AO/PI特异性染色可以准确区分死活细胞，此外实验室常用DAPI进行染核。DAPI是一种能与DNAQL结合的荧光染料，结合到双链DNA上的荧光强度提高约20倍。在实验过程中，固定细胞后导致细胞膜通透性增加，再加上DAPI的强结合性，便可高敏感性显示出基因表达的亚细胞情况，进行基因定位。

• 荧光蛋白

常见有绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（RFP）。

使用较多的就是GFP，通过基因工程将其转入基因组持续表达。在北冰洋寒冰水域，维多利亚多管水母体内发现了GFP，后有三位科学家分别将其投入试验研究，并进行荧光的加强改造，ZZ获得了2008年的诺贝尔化学奖。

广泛应用后，GFP在显像技术、示踪技术、报告基因等应用中大放异彩。由于其独特的光信号转到机制，研究者将具有信号转导的分子识别点，结合到荧光蛋白分子上设计生物感受器。可检测核酸、激素等多种分子的表达状况，甚至还能检测活体细胞中蛋白的构象变化，具有较为广阔的应用前景。

三、C100自动细胞计数仪荧光功能

实验室在做真核细胞转染时，一般都会将GFP连入质粒，通过荧光的表达，再通过DAPI定位细胞核检测转染的效率。

效率又是如何计算的呢？粗略估算？手动计数？用流式细胞仪？费时费力不说，约仪器还麻烦。瑞沃德新款自动细胞计数仪C100荧光功能可快速准确计算结果细胞数量，为您的实验保驾护航。

荧光展示图

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