提取基因组dna过程中，如何去除蛋白质，多糖和脂类等生物大分子

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  允浩先森 2017-06-07 00:00:00

  提取基因组dna过程中，如何去除蛋白质，多糖和脂类等生物大分子 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法， 以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的YZ作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时， 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗为材料，学习基因组DNA提取的一般方法。 DNA 一、材料 水稻幼苗 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离 心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液?：100mmol/L Tris?Cl， pH8.0， 20mmol/L EDTA， 500mmol/L NaCl， 1.5% SDS。 2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液：配方见diyi章。 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤： （一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?， 60?水浴预热。 2. 水稻幼苗或叶子5-10g， 剪碎， 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热 的离心管中， 剧烈摇动混匀， 60?水浴保温30-60分钟(时间长，DNA产量高)， 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液， 颠倒混匀(需带手套， 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟， 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟， 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60?水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟， 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl)， 37? 10分钟， 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇，混匀，-20?放置20分钟左右，DNA形成絮状沉淀。

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