气相色谱应用的实验

气体发生器在使用过程中遇到的问题有两个比较常见，一是可靠性难以保证，是安全性存在问题。其可靠性难以保证具体表现在有部分发生器的纯度不够，氮气和氢气中含水量高而且还带有的腐蚀性，如果操作不当会有返液现象发生。上述情况会造成色谱仪不容易稳定和色谱柱的柱效降低，严重的可以使气路和色谱柱报废，甚至导致色谱仪全部报废。其次是使用过程中的安全性存在问题，有部分气体发生器的压缩机在使用的过程中会产生过热、气路进油、漏电等现象，不仅对色谱仪造成损害，严重时会危及操作人员的生命安全。

因为色谱仪使用高纯氮或高纯氢做载气，为了应对上述问题，我们从氢发生器、氮发生器和压缩机的安全可靠性三个方面总结了几点经验供大家参考。空气作为辅助气其纯度要求不高，经过脱水除油后基本上都能满足色谱仪分析要求，所以本文不再详细分析。

，氢发生器主要由电解系统、压力控制系统、净化系统和显示系统组成电解采用目前膜分离技术，由红外光电反馈装置与开关电源组成的压力控制系统，使氢气的发生量根据输出的需要自动调整，维持输出流量和压力的稳定。采用这种原理产生的氢气存在的主要的问题有：
1.加KOH水溶液的氢发生器所产生的氢气中含水量高且带有腐蚀性，容易造成色谱仪调试不稳定，一旦长时间使用该氢气做载气必然造成色谱柱柱效降低。

2.利用该原理产生的氢气如果长时间使用，会造成严重的返液现象。为了防止返液，厂家设计了各种装置来尝试解决这个问题，但是均不能解决根本性的问题。毕竟它还是要加液的，一旦防返液的装置出现故障就会造成气路及色谱柱报废，严重的甚至可能导致气相色谱仪全部报废。

3.气体的纯度大多没有经过检测，虽然可以通过基线和柱子使用寿命判断其纯度，结果却是给色谱柱造成不必要的损失。

所以氢气作为辅助气还行，做载气纯度不够。在选择氢发生器时优先考虑质量有保证的厂家，也可以加装在线纯度检测装置保证气体的纯度。

其次，氮气发生器能否很好地应用于气相色谱分析实验，与发生器的原理有很大关系。氮气发生器的工作原理大致分为三种：
1.以电化学分离法和物理吸附法相结合的方式
2.采用中空纤维膜分离
3采用气相色谱技术用新型合成分子筛分离

一、电化学分离法和物理吸附法：
采用这种原理产生的氮气存在的问题很多。主要的问题有：
1.加KOH水溶液的氮气发生器所产生的氮气中含水量高且带有腐蚀性。
2.存在返液现象。  
3.氮气纯度偏低，对色谱仪的热导检测器的热敏元件会造成氧化，时间久热导检测器的灵敏度降低。

鉴于存在以上三点的问题，很多色谱仪厂家、仪器经销商及维修人员均不建议使用该种原理产生氮气的发生器来做气相色谱仪载气。

二、采用中空纤维膜法：
氮膜系统可将廉价的空气中氮从78％提高到95％以上，高可得到99.9％的纯氮。该氮气发生器可以用于气相色谱仪做载气，仅适用于分析组分成分要求不高的行业。

三、采用气相色谱技术用新型合成分子筛分离：
这是一种新型的空气分离方法，它以压缩空气为原料，合成分子筛为吸附剂，气相色谱分离吸附流程，在常温低压下，利用空气中的氧和氮在分子筛中的扩散速度不同，把氧和氮加以分离，氮气的纯度和产气量可按客户需要调节。所产生气体流速稳定，氮气纯化，产出的氮气纯度高，高可得到99.9995％的纯氮，适用于各种气相色谱检测器。该发生器可以生产出高质量和高纯度的氮气，运行稳定可靠，不需要任何化学消耗品。操作方便，可24小时无人值守。且它可以在不需任何监管和低保养的情况下无故障地运行。

综上所述，采用气相色谱分离技术用合成分子筛分离法的氮气发生器优于采用电化学分离法和物理吸附法以及中空纤维膜法的氮气发生器。它可以应用于国内外各种不同类型的气相色谱仪用作载气，是性能优良维护方便的新一代氮气发生器。

后，为保证发生器压缩机的安全可靠的运行，还需要注意两点：
1、因压缩机是感性负载，通断电时的瞬时电流比正常工作时高数倍，较易熔断保险。压缩机的启动和停止会对电网电压造成干扰，所以色谱仪和发生器的电源要分开，或者经过稳压电源供电。在工作过程中出现两种情况压缩机会停止工作，一是压缩机温度过高热保护继电器启动，二是电压不稳定导致电路故障。所以在使用发生器时不仅环境需要保证通风良好，而且采用稳压电源供电显得尤为重要。

2、有部分生产厂家使用冰箱的压缩机替代空气压缩机，这种做法违反了相关安全规定，使用的过程中会产生过热、气路进油、漏电等现象，对色谱仪造成损害，严重的会危及操作人员的生命安全。在购买发生器要注意发生器的压缩机是否符合要求。

现在的发生器厂家，生产的发生器性能已经得到大幅提升，已经出现了专门供24小时365天连续运行的发生器发生器采用多台发生器并联方式供气通过工作站监控每台发生器的状态，并测定氧含量等多种方式监测单台发生器工作状态，并能自动平衡单台发生器工作负荷，平衡各台发生器的供气量。一旦监控系统发现单台发生器发生纯度不够，水位偏低等故障，系统会自动停止该发生器运转，并将该发生器负荷平均调整到其他所有发生器上。维护修复后，系统监测发生器状态完好后，会自动并网供气。除了色谱需要高纯度气体无法满足外，可以取

气体发生器在使用过程中遇到的问题有两个比较常见，一是可靠性难以保证，是安全性存在问题。其可靠性难以保证具体表现在有部分发生器的纯度不够，氮气和氢气中含水量高而且还带有的腐蚀性，如果操作不当会有返液现象发生。上述情况会造成色谱仪不容易稳定和色谱柱的柱效降低，严重的可以使气路和色谱柱报废，甚至导致色谱仪全部报废。其次是使用过程中的安全性存在问题，有部分气体发生器的压缩机在使用的过程中会产生过热、气路进油、漏电等现象，不仅对色谱仪造成损害，严重时会危及操作人员的生命安全。
因为色谱仪使用高纯氮或高纯氢做载气，为了应对上述问题，我们从氢发生器、氮发生器和压缩机的安全可靠性三个方面总结了几点经验供大家参考。空气作为辅助气其纯度要求不高，经过脱水除油后基本上都能满足色谱仪分析要求，所以本文不再详细分析。
，氢发生器主要由电解系统、压力控制系统、净化系统和显示系统组成电解采用目前膜分离技术，由红外光电反馈装置与开关电源组成的压力控制系统，使氢气的发生量根据输出的需要自动调整，维持输出流量和压力的稳定。采用这种原理产生的氢气存在的主要的问题有：
1.加KOH水溶液的氢发生器所产生的氢气中含水量高且带有腐蚀性，容易造成色谱仪调试不稳定，一旦长时间使用该氢气做载气必然造成色谱柱柱效降低。
2.利用该原理产生的氢气如果长时间使用，会造成严重的返液现象。为了防止返液，厂家设计了各种装置来尝试解决这个问题，但是均不能解决根本性的问题。毕竟它还是要加液的，一旦防返液的装置出现故障就会造成气路及色谱柱报废，严重的甚至可能导致气相色谱仪全部报废。
3.气体的纯度大多没有经过检测，虽然可以通过基线和柱子使用寿命判断其纯度，结果却是给色谱柱造成不必要的损失。
所以氢气作为辅助气还行，做载气纯度不够。在选择氢发生器时优先考虑质量有保证的厂家，也可以加装在线纯度检测装置保证气体的纯度。
其次，氮气发生器能否很好地应用于气相色谱分析实验，与发生器的原理有很大关系。氮气发生器的工作原理大致分为三种：
1.以电化学分离法和物理吸附法相结合的方式
2.采用中空纤维膜分离
3采用气相色谱技术用新型合成分子筛分离
一、电化学分离法和物理吸附法：
采用这种原理产生的氮气存在的问题很多。主要的问题有：
1.加KOH水溶液的氮气发生器所产生的氮气中含水量高且带有腐蚀性。
2.存在返液现象。  
3.氮气纯度偏低，对色谱仪的热导检测器的热敏元件会造成氧化，时间久热导检测器的灵敏度降低。
鉴于存在以上三点的问题，很多色谱仪厂家、仪器经销商及维修人员均不建议使用该种原理产生氮气的发生器来做气相色谱仪载气。
二、采用中空纤维膜法：
氮膜系统可将廉价的空气中氮从78％提高到95％以上，高可得到99.9％的纯氮。该氮气发生器可以用于气相色谱仪做载气，仅适用于分析组分成分要求不高的行业。
三、采用气相色谱技术用新型合成分子筛分离：
这是一种新型的空气分离方法，它以压缩空气为原料，合成分子筛为吸附剂，气相色谱分离吸附流程，在常温低压下，利用空气中的氧和氮在分子筛中的扩散速度不同，把氧和氮加以分离，氮气的纯度和产气量可按客户需要调节。所产生气体流速稳定，氮气纯化彻底，产出的氮气纯度高，高可得到99.9995％的纯氮，适用于各种气相色谱检测器。该发生器可以生产出高质量和高纯度的氮气，运行稳定可靠，不需要任何化学消耗品。操作方便，可24小时无人值守。且它可以在不需任何监管和低保养的情况下无故障地运行。
综上所述，采用气相色谱分离技术用合成分子筛分离法的氮气发生器优于采用电化学分离法和物理吸附法以及中空纤维膜法的氮气发生器。它可以应用于国内外各种不同类型的气相色谱仪用作载气，是性能优良维护方便的新一代氮气发生器。
后，为保证发生器压缩机的安全可靠的运行，还需要注意两点：
1、因压缩机是感性负载，通断电时的瞬时电流比正常工作时高数倍，较易熔断。压缩机的启动和停止会对电网电压造成干扰，所以色谱仪和发生器的电源要分开，或者经过稳压电源供电。在工作过程中出现两种情况压缩机会停止工作，一是压缩机温度过高热保护继电器启动，二是电压不稳定导致电路故障。所以在使用发生器时不仅环境需要保证通风良好，而且采用稳压电源供电显得尤为重要。
2、有部分生产厂家使用冰箱的压缩机替代空气压缩机，这种做法违反了国家相关安全规定，使用的过程中会产生过热、气路进油、漏电等现象，对色谱仪造成损害，严重的会危及操作人员的生命安全。在购买发生器要注意发生器的压缩机是否符合要求。
现在优良的发生器厂家，生产的发生器性能已经得到大幅提升，已经出现了专门供24小时365天连续运行的发生器发生器采用多台发生器并联方式供气通过工作站监控每台发生器的状态，并测定氧含量等多种方式监测单台发生器工作状态，并能自动平衡单台发生器工作负荷，平衡各台发生器的供气量。一旦监控系统发现单台发生器发生纯度不够，水位偏低等故障，系统会自动停止该发生器运转，并将该发生器负荷平均调整到其他所有发生器上。维护修复后，系统监测发生器状态完好后，会自动并网供气。除了特别色谱需要高纯度气体无法满足外，可以取代钢瓶供气，且安全稳定，质量相对更可靠。

　　免疫荧光实验原理

　　免疫荧光(IF)是使用显微镜深入了解细胞结构和过程的有效方法。此方法可评估特定蛋白质的表达和位置，使得免疫荧光成为科学家解决许多细胞生物学问题不可或缺的工具。

　　免疫荧光实验基于以下主要步骤：

　　1.特异性抗体与感兴趣的蛋白质结合。

　　2.荧光染料与这些免疫复合物偶联，以便使用显微镜观察感兴趣的蛋白质。

　　内皮细胞中vWF的免疫荧光染色。肌动蛋白用phalloidin染色(绿色)，细胞核用DAPI染色(蓝色)。

　　区分直接和间接免疫荧光。在直接免疫荧光中，一抗直接偶联到荧光团（也称为荧光色素），便于处理和快速可视化。在间接免疫荧光中，使用特异性结合一抗的二级荧光团偶联抗体来可视化感兴趣的结。

　　尽管di二种方法比直接免疫荧光更耗时，但它有几个显著的优势，比如它通常更便宜，因为二抗可以用于不同的一抗。此外，通过结合多个一抗和特定的二抗(每个抗体都用不同的荧光团标记)，可以在单个样品中平行特异地显示多个蛋白质(多色免疫荧光)。

　　免疫荧光染色:典型的工作流程

　　每个免疫荧光染色方案由培养、固定、染色、成像四个主要步骤组成，可细分如下:

　　免疫荧光染色是一种非常敏感的方法，可能需要排除故障《免疫英冠染色故障排除指南》。方案中的微小变化可能会导致不同的结果，而这些结果不再具有可比性。因此，在您的特定方案中精确地保持完全相同的条件是非常重要的(例如，细胞密度、抗体稀释度、培养温度和培养时间)。

　　免疫荧光实验方案对比

　　传统染色与ibidi方案染色

　　当使用任何ibidi解决方案时，ibidi的免疫荧光染色方案比传统方案要简便快速的多。无需在松散的盖玻片上生长细胞，细胞可直接在ibidi玻片上生长和染色。

　　用于免疫荧光应用的各种ibidi产品

　　更多ibidi相关产品的免疫荧光实验应用可查阅我们雷萌公众号相关文章！

　　参考文献

　　K.G. Zyner, A. Simeone, S.M. Flynn, et al. G-quadruplex DNA structures in human stem cells and differentiation. Nat Commun, 2022, 10.1038/s41467-021-27719-1

　　C. Xu, et al. NPTX2 promotes colorectal cancer growth and liver metastasis by the activation of the canonical Wnt/beta-catenin pathway via FZD6. Cell Death & Disease, 2019, 10.1038/s41419-019-1467-7

　　Kobayashi, T., et al. Principles of early human development and germ cell program from conserved model systems. Nature, 2017, 10.1038/nature22812

　　H. Tada et al. Porphyromonas gingivalis Gingipain-Dependently Enhances IL-33 Production in Human Gingival Epithelial Cells. PloS one, 2016, 10.1371/journal.pone.0152794

　　Read article

　　对于在农产品方面的研磨检测试验，更适合应用的研磨设备高通量组织研磨仪，选择优质的种子用于农业生产，是为了杜绝或减少因种子质量问题而造成的缺苗减产现象，同时也是为了减少对农业生产的盲目性和风险，可有效控制有害杂草的传播和危害，充分发挥其优质种子的丰产特性，保证农业生产的安全性，提高农业生产的效益化。

　　选择优质种子，其对种子的研磨检测试验也是一个必不可少的步骤。在许多对种子检测的项目中，种质资源的选育是一个关键环节，特别是对种子纯度的测定。种子的表现形式主要是个体，种子纯度的检测则是用来检测种子的质量高低。

　　因此，只有充分研磨种子并有效提取DNA，才能准确测定种子的纯度如何，而适合的方法就是选用高通量组织研磨仪来对种子进行研磨提取。
　　
　　经过大量的实践表明，应用高通量研磨仪对种子的检测试验是一种有效、GX的检测方法。像：水稻、玉米等种子样品在经过组织研磨仪研磨后，可在短时间内被磨成均匀的粉末状，便于后续的实验提取分析，同时也广泛应用于种子的检测实验中。
　　
　　研磨设备的应用，使得种子检验的水平也有所提高，也确保了种子生产的质量，为现代农业生产输送了大量优质的农作物种子，不仅保障了农业生产的安全，也为实现农业增产和增收奠定了坚实的基础。

　　现在，你总该明白为何还是高通量研磨仪适合农产品种子的检测了吧，其实除了对种子的研磨提取，还可对其他细胞生物进行研磨粉碎，有效提取其DNA等成分，以更好的进行后续的实验检测。

　　对于植物样本的粉碎是经常会遇到的一种样本处理，常用来处理的样本多是一些草本植物，但由于不同性质药材的性质不同，所需选用的实验设备便有所不同；但针对那么多种类型的草本植物不能粉碎一种换一种设备，针对这一问题，推荐您可选择使用多样品组织研磨机完成实验应用。

　　组织研磨仪是实验室样品制备的常用仪器。主要是通过碳化钨球或不锈钢珠在样品管内的来回冲击震荡，可快速实现对生物样品的粉碎、混合、均化以及细胞破碎等，能够满足样品理化分析实验的要求；实验设备可配置不同体积、不同材料的球磨罐，可对生物样品分别进行干磨、湿磨及冷冻研磨等，可更好的破碎细胞提取纯化样本DNA/RNA等核酸蛋白质，被广泛应用于农业、生物医学、食品、质检等行业领域。

　　多样品研磨设备是属于二维振动球磨机，主要适用于对动植物组织和纤维样品的快速混合破碎；由于许多中药材料是植物的根和叶组织，所以可选用该实验设备对中草药样品进行粉碎破碎。

　　实验室设备在对中药材的粉碎出料粒度符合实验要求；可选用氧化锆、聚四氟乙烯等材质的球磨罐和磨珠应用，能够有效避免对样品间的交叉污染；可将球磨罐放入液氮中进行预冷冻，降低处理温度，更适合糖粘性中草药样品的粉碎；封闭的球磨罐不但可避免样品水分的挥发，还可避免样品的交叉污染；适用于微量、小、中量样品的细胞破碎。

　　综上便是选用多样品组织研磨机对中草药样品前处理的实验应用分析，不但可避免传统粉碎带来的一系列弊端问题，还能够多样的处理生物样本。