全部评论(6条)
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- 白首不相离HHH 2010-08-16 00:00:00
- 色谱的正反相是根据固定相和流动相的相对极性比较而区分的。一般情况如下: 正相色谱:固定相极性大于流动相极性:常见的色谱柱有:硅胶色谱柱、氨基色谱柱、苯基色谱柱、氰基色谱柱等。 反相色谱:固定相极性小于流动相极性:常见的色谱柱有:C18色谱柱、C8色谱柱等。 “生化色谱网”在色谱方面非常专业,建议你去看看。那里对色谱产品都按照“正相、反相”进行了区分。你查一下就知道了。
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- 一切都是命运95 2010-08-16 00:00:00
- 流动相的极性小于固定相的极性为正相色谱,流动相的极性大于固定相的极性为反相色谱。
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- CAPF颓废 2010-08-16 00:00:00
- 其实所谓的正相反相主要取决于你选择的色谱柱的填料类型 正相色谱:极性小的组分先出柱,固定相极性大于流动相极性:常见的色谱柱填料有:硅胶色、氨基色、苯基色、氰基等。 反相色谱:极性大的组分先出柱,固定相极性小于流动相极性:常见的色谱柱填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C1(SAS)、CN(CPS)等。
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- b747269802 2017-10-01 03:39:03
- 正相色谱:固定相极性大于流动相极性 反相色谱:固定相极性小于流动相极性
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- 幸运的果021 2017-10-09 10:44:20
- GX液相色谱的正相与反相区分方式如下: 正相色谱:固定相极性大于流动相极性;反相色谱:固定相极性小于流动相极性。 GX液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。GX液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
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- 包头瓷砖背景墙 2010-08-24 00:00:00
- 楼主的意思是看流动相和固定相的类型来区分正相还是反相么 正相反相取决于固定相的极性高于流动相是正相反之则反 流动相极性大于固定相,称之为反相 流动相极性小于固定相,称之为正相 看色谱柱的固定相填料是什么 正相色谱法 采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等)。 反相色谱法 一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用Z为广泛,据统计,它占整个HPLC应用的80%左右。 根据流动相 固定相之间的极性大小 来区分的 \(^o^)/~ 流动相极性大于固定相,称之为反相 流动相极性小于固定相,称之为正相 建议您可以到行业内专业的网站进行交流学习! 在此,我推荐您分析测试百科网!我和我身边很多人也都是在这个网站学习很成长起来的!
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反相液相色谱(Reverse Phase Liquid Chromatography, RPLC)是一种基于疏水相互作用的高效分离技术,广泛应用于蛋白质及多肽的分离、纯化与分析。其核心原理在于固定相与流动相的极性差异,以及样品分子与固定相之间的疏水分配效应。以下将从分离机制、蛋白质特异性行为、固定相与流动相选择、应用场景等角度展开说明。
反相色谱的固定相通常由疏水性材料(如C18、C8或C4键合硅胶)构成,而流动相为极性溶剂(如水、甲醇或乙腈)。分离过程中,蛋白质的疏水区域与固定相发生非共价结合,极性较强的分子优先被流动相洗脱,疏水性更强的分子则因保留时间延长而实现分离。梯度洗脱是优化分离效果的关键手段,通过逐步增加有机溶剂比例削弱疏水作用,从而按疏水性差异依次洗脱目标分子。
蛋白质在反相色谱中的行为具有特殊性。由于流动相中常添加三氟乙酸(TFA)等离子对试剂,蛋白质可能发生部分去折叠,暴露出内部疏水残基,增强与固定相的相互作用。此外,低浓度TFA可诱导蛋白质形成伸展构象,导致其在死时间前洗脱;而高浓度TFA通过形成离子对使蛋白质构象紧凑(如“熔融球体”),延长保留时间。这种构象敏感性使反相色谱不仅能分离蛋白质,还可用于研究其构象稳定性与表面疏水性。
固定相的选择需综合考虑蛋白质大小与疏水性。C18和C8适用于小分子肽段,而C4因较短的烷基链更适合大分子蛋白质,避免过度保留。流动相中,乙腈因低黏度和高洗脱能力成为首选有机溶剂,TFA则通过抑制硅醇基电离减少峰拖尾。梯度优化需平衡分辨率与时间成本,例如降低最大有机溶剂浓度可改善峰分离,但可能延长分析周期。
在应用层面,反相色谱凭借高分辨率与质谱兼容性,成为蛋白质组学研究的重要工具。其典型场景包括:多肽药物的纯度分析、酶解产物的肽图绘制、翻译后修饰(如磷酸化、糖基化)的检测,以及蛋白质构象变化的动态监测。例如,与质谱联用时,反相色谱可分离复杂肽段混合物,通过质谱鉴定实现蛋白质序列的高通量解析。此外,其在治疗性抗体表征中的应用也日益增多,尤其在检测聚集体与降解产物方面表现卓越。
操作参数的设置直接影响分离效能。流速需根据色谱柱内径与填料粒径调整,通常内径4.6mm的C18柱推荐流速为1mL/min。压力上限需控制在柱耐受范围内(通常≤6000psi),以避免固定相塌陷。检测方法方面,紫外检测(280nm)依赖蛋白质中芳香族氨基酸的吸收,而质谱联用可提供分子量及结构信息,灵敏度更高。
总之,反相液相色谱通过疏水相互作用与动态梯度洗脱,实现了蛋白质的高效分离与分析。其独特的构象敏感性、灵活的固定相选择及与质谱的兼容性,使其在生物医药与基础研究中不可或缺。未来,随着新型固定相(如表面多孔颗粒)与微流控技术的发展,反相色谱在蛋白质分析中的分辨率与通量将进一步提升。
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