多重PCR技术要点解析

多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其基本原理与常规PCR相同，区别在于多重PCR反应体系加入一对以上引物，各对引物分别结合在模板相对应部位，最终扩增出一条以上目的DNA片段。

多重PCR的特点

•高效性：在同一PCR反应管内同时检出多种基因，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是微量样本的多基因检测。

•系统性：多重PCR适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检。

•经济简便性：多种病原体在同一反应管内同时检出，将大大的节省时间，节省试剂，节约经费开支。

多重PCR应用

•基因诊断、肿瘤诊断、病原微生物的检测。

•基因分型、连锁分析。

•植物分子育种、基因表达检测、病虫害检测。

•病原菌污染检测。

•区域捕获测序。

多重PCR之难

多重PCR并不是单纯的将多对特异性引物混合成一个体系。多重PCR之所以难，在于多个靶点之间扩增条件不兼容，每个靶点都需要旁边其他的引物配合。

就像是三人两足游戏一样，每个靶点成功扩增都是需要绑在一起的两个人（一对引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的选手同时起跑又同时到达，并且所有的选手都达到发挥。

多重PCR优化

为了达到更好的扩增效果，一般可以通过以下几个方面进行优化。

◆引物的优化：

◆反应体系：

◆反应条件：

◆常见问题解决办法：

多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪，则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候，不应墨守成规，要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化，达到扩增效果。

基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势，技术不断改进后，更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。

但是在CRISPR基因编辑之后，工作并没有结束，你需要验证感兴趣的基因是否成功突变。想知道如何利用高灵敏度、高jingzhun度的数字PCR技术来检测基因编辑吗？快来参加本次深蓝云直播课堂吧！

空气采样器多重?

       随着科学技术的发展，冷冻干燥技术越来越好，冷冻干燥机的发展也越来越快速，其应用范围也越来越广泛，然而为了能让冷冻干燥机更好地运行，有很多需要注意的要点，不仅仅在使用期间，在其开机关机的时候也有很多需要注意的细节，下面我们就来仔细说说。

　　一、冷冻干燥机的开机

　　1打开冷冻干燥机机箱左侧的总电源开关，气压数显为大气压110pk；

　　2按住冷冻干燥机控制面板上的总开关键三秒钟以上，温度数显为冷阱的实际温度；

　　3启动制冷机，预冷30分钟以上；

　　4将样品放入样品架，盖上有机玻璃罩，并启动真空泵；

　　5待气压数显稳定后，记录温度和气压数值。

　　二、冷冻干燥机的停机

　　1纪录停机前的温度和气压数值；

　　2按住冷冻干燥机控制面板的充气阀，并立即关闭真空泵；

　　3气压数显为大气压时，打开有机玻璃罩，取出样品；

　　4关闭制冷机，按住总开关键三秒以上，*后关闭总电源开关；

　　5等冷阱中的冰完全化成水后，打开机箱左侧的出水阀放水，并用干布清洁冷阱内壁，盖上大张滤纸防尘。

　　三、冷冻干燥机的注意事项

　　1制备样品应尽可能扩大其表面积，其中不得含有酸碱物质和挥发性有机溶剂；

　　2样品必须完全冻结成冰，如有残留液体会造成气化喷射；

　　3注意冷阱约为零下65度，可以做低温冰箱使用，但必须戴保温手套操作防止冻伤；

　　4启动真空泵以前，检查出水阀是否拧紧，充气阀是否关闭，有机玻璃罩与橡胶圈的接触面是否清洁无污物，良好密封；

　　5一般情况下，该机不得连续使用超过48小时；

　　6冷冻干燥机样品在冷冻过程中，温度逐渐降低，可以将样品取出回暖一段时间后(仍处于冰冻状态)，继续干燥，以缩短干燥时间。

　　以上就是冷冻干燥机开关机及使用时需要注意的要点，在使用冷冻干燥机前需要对其有一定的了解，有利于提高我们自身的工作能力和后期操作水平，也能保证冷冻干燥机更好地运行。

（来源：青岛永合创信电子科技有限公司）