怎样取植物样本用来验DNA

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  iypoctnm 2017-05-31 00:00:00

  你可百度一下“植物DNA提取”，就会有很多实验方法出来了。 如：植物DNA的CTAB提取法： 1 称取新鲜叶片2-3g，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。2 将粉末转移到的加有7ml经预热的1 5×CTAB提取缓冲液15ml离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30min。3 取出离心管，冷却至室温，加入氯仿/异戊醇(24:1)，充分混匀，室温下2300×g离心20min。4 将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀，2300×g离心20min。5 转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000×g离心10min，使DNA沉淀于管底。6 加入1 5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。待DNA完全溶解后，加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀，挑出DNA，置于1 5ml离心管中，用70%乙醇清洗30min，用离心机甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。7 将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。

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  面瘫是班头啊 2017-05-31 00:00:00

  不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同;不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法，以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的YZ作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。本实验以水稻幼苗为材料，学习基因组DNA提取的一般方法。DNA一、材料水稻幼苗二、设备移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。三、试剂1、提取缓冲液?：100mmol/LTris?Cl，pH8.0，20mmol/LEDTA，500mmol/LNaCl，1.5%SDS。2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇4、RnaseA母液：配方见diyi章。5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/LNaAc。四、操作步骤：（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?，60?水浴预热。2.水稻幼苗或叶子5-10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60?水浴保温30-60分钟(时间长，DNA产量高)，不时摇动。3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀(需带手套，防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟，使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。4.室温下5000rpm离心5分钟。5.仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6.在1.5mleppendorf中加入1mlTE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。7.如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60?水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管。9.加入5μlRNaseA(10μg/μl)，37?10分钟，除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。10.加入1/10体积的3mol/LNaAc及2×体积的冰乙醇，混匀，-20?放置20分钟左右，DNA形成絮状沉淀。

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