质粒提取与纯化的区别做酶切的质粒需要做纯化吗

skyu132 2017-01-31 09:19:36 484 浏览

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碳噫9勺 2017-02-01 00:00:00

这个由几个方面的因素决定： 1.保存的酶切质粒是否经过纯化，如果经过纯化，比较容易保存 2.此酶切质粒是否经过反复冻融.如果频繁多次冻融，DNA会比较容易降解，所以建议保存的时候能够分装冻存，每次取出一部分来，不反复冻融，保存会比较好 3.酶切质粒的浓度，通常浓度越高，质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET载体，保存在-20C半年多都能用，就是做得很浓 4.为了保险起见，可以在连接前取一小部分载体去电泳看一下，有没有降解，如果条带清晰，亮度也理想的话，没有问题，可以使用的.

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东曹色谱产品在质粒DNA纯化与分析中的应用

质粒（plasmid）是一种小型环状DNA，在基因工程中常利用质粒作为运载体，将目的基因转移到受体细胞内。虽然近年来开发了不少更为先进的基因转移载体（如慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体等），但质粒载体由于制备简便以及在各类细胞中的GX转染率，仍然被大多数实验室使用。

随着基因ZL的迅速发展，高纯度的质粒DNA的需求量越来越大。在纯化质粒DNA时，除了需要去除混入的蛋白质、RNA、内毒素和宿主基因组DNA等杂质以外，还需要去除质粒DNA的立体异构体Open circular体（开环状质粒）和Linear体（直链线状质粒），只对Supercoiled体（超螺旋状质粒）进行纯化。

本篇推送中列举了东曹TSKgel色谱柱和Toyopearl层析填料在质粒DNA纯化与分析中的应用实例和相关文献，供大家参考。

01 质粒的色谱分离模式

使用阴离子交换色谱分析质粒DNA

基因ZL实验中质粒纯度的检测方法之一是测量开环质粒和超螺旋质粒的相对量。下图是采用阴离子交换色谱柱TSKgel DNA-NPR分析质粒的谱图。

此款色谱柱采用无孔的亲水聚合物基质填料，表面由弱阴离子交换基团改性，具有极高的蛋白回收率。适用于对DNA片段，PCR产物及质粒的GX分离。

02 质粒的纯化工艺步骤示例

在质粒DNA的纯化工艺中通常使用阴离子交换层析、疏水层析和尺寸排阻层析。质粒DNA与内毒素相比，其疏水性非常低，所以使用疏水填料可以从质粒DNA中有效去除内毒素。

使用Toyopearl Butyl-650S疏水填料纯化质粒

03 使用TSKgel和TOYOPEARL分离纯化质粒载体的应用实例

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