反转录自己合成poly（T）引物多长比较合适

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  晧瀚 2017-02-20 00:00:00

  反转录的差异显示PCR不同于DNA直接进行PCR. 首先，我们需要扩增的是DNA，反转录酶是必须的. 楼主应该知道，DNA的PCR不像体内DNA合成那样，体内合成需要RNA引物，而体外是不需要RNA引物，而是随机引物. 这里的随机引物要从这几个方面来理解. 1）mRNA有Poly-A尾巴，我们可以合成一段Poly-T作为引物 2）有一个矛盾需要解决，就是Poly-A的尾巴长度是不确定的，如何确定引物Poly-T的长度呢?这个没有具体限制，实验中发现，不低于10个都是没有问题的. 3）仅仅如此时不够的，这样做得来的DNA肯定会长短不一，所以，在Poly-T后面再增加一般是2个碱基，那么，引物总共可设计的就有12种（为什么是12种楼主自己去看，我就不多说了）.这就叫随机引物. 同学，锚定引物PCR是用于扩增已知序列的DNA，根据其一端已知的序列设计好引物，这个引物不是多聚T或者多聚A之类的了，是已知的. 如，要扩增ATGCCGTGCG……，我们就设计引物TACGGCACGC……

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