血液dna提取为什么用edta抗凝血

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  zky914 2017-02-01 00:00:00

  1.1 样本来源 静脉抽取30份健康体检者血样.10份用EDTA抗凝， 10份不加抗凝处理，10份不抗凝在-40 ℃冻存2 a左右. 1.2 DNA提取方法 取凝血块，用9 g/L 氯化钠匀浆大约30 s，每换一个样本都要用70%乙醇和9 g/L 氯化钠清洗匀浆器以避免交叉污染.取匀浆后样本1 ml置于离心管中，室温8 000 r离心5 min后，去掉上层.血细胞在1 ml的Tris缓冲液I(10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0；10 mmol/L 氯化钾；10 mmol/L 氯化镁；2 mmol/L EDTA，pH 8.0；25 mL/L Triton X?100)中裂解10 min， 其间轻轻用力充分混匀， 室温10 000 r离心2 min，沉淀要用Tris 缓冲液I洗2次.将沉淀用220 μl的Tris 缓冲液II (10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0；10 mmol/L 氯化钾；10 mmol/L 氯化镁；2 mmol/L EDTA，pH 8.0；0.4 mol/L 氯化钠；10 g/L SDS)悬浮，轻轻振荡试管， 使底部细胞团块散开，在56 ℃保温15 min裂解.加入100 μl 5 M 氯化钠充分振荡沉淀去除蛋白质.10 000 r离心5 min，取上清.加2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA后，10 000 r离心5 min，弃上清.室温晾20 min左右待酒精挥发干净后以适量TE缓冲液(10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0，1 mmol/L EDTA)回溶.EDTA抗凝血中DNA的提取从去掉上层开始.

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