等密度梯度离心需要将percoll液与细胞悬液混匀吗

　　此次实验主要是为膝关节滑液组织制备单细胞，让我们一起来看看净信单细胞制备仪是如何制备膝关节滑液组织单细胞悬液，对其样品前处理效果和悬液效果如何？

　　实验地点：上海**大学医学院东区单细胞中心

　　实验仪器：单细胞悬液制备仪（温控型）JX-CKSM-6WK

　　样品前处理制备实验步骤：

　　1、打开仪器电源开关，将仪器界面中的加热点开预热一段时间持恒温。

　　2、将组织稍微剪切成小块，放入净信2ml研磨管中。

　　3、加入净信消化酶旋上盖子，上下微微晃动将其组织和消化酶均匀混合。

　　4、将混合好的研磨管放入加热模块中，再将研磨管放入热板中，盖上盖子。

　　5、启动设备，待设备停止运行后打开仪器盖子，取出样品管

　　6、将样品管中的液体和剩下的组织一起倒入过滤管中，再加入终止液后得到浑浊的液体，即单细胞悬液。

　　样品处理前后效果图：

　　显微镜下的细胞呈现：

　　实验样品组织制备注意事项：

　　1、消化酶和终止液均需要在冷冻环境下保存

　　2、消化酶解冻时需在常温条件下解冻，不可以放入水浴或者其他加热仪器中解冻，温度升高对酶的活性会有很大的影响。

实验目的：制备小鼠大脑的单细胞悬液

实验仪器：单细胞悬液制备仪，研磨套装管，滤管，移液枪，培养皿，镊子，手术刀

实验试剂：PBS液，净信消化酶，终止液

操作步骤：

1、开机预热，打开加热模块1，加热模块2

2、取活体组织后，放入PBS液中去红，然后取20-50mg（约小米粒大小），再分成若干等分

3、把消化酶用移液器加入研磨套装管中，将加满消化酶的离心管放入预热模块中预热几分钟

4、将处理好的组织用镊子转移到加满消化酶的离心管中

5、将装满消化酶和组织的离心管放置到加热板中，选择25分钟程序，开始运行

6、程序结束取出离心管，将消化好的组织液转移到过滤管中，即得到一管单细胞悬液

仪器介绍：

上海净信单细胞制备仪JX-CKSM-6WK（6通道加热型）是一种集成金属浴消化与温和剪切组织的新一代细胞悬液制备设备，应用于流式细胞术/单细胞测序/原代细胞培养等实验，具有起始组织量小，时间短，细胞得率高，细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计，低噪音，使用方便，性能稳定。

应用领域：肿瘤研究 心血管研究 干细胞研究 免疫研究 神经科学研究

产品应用：

单细胞测序（Single-Cell RNASeq)

多色流式分析（Multicolor Flow Cytometry)

质谱流式细胞计数（Mass Cytometry)

原代细胞分离培养（Primary Cell Isolation And Culture)

细胞ZLCAR-T

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