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- hlzxh1979 2017-07-29 00:00:00
- 研究DNA-蛋白质相互作用的实验方法主要包括:a、凝胶阻滞实验; b、DNase 1 足迹实验;c、甲基化干扰实验; d、体内足迹实验; f、拉下实验。研究蛋白质/ 核酸相互作用近期采用的新技术有:核酸适体技术、生物信息学方法、蛋白质芯片技术以及纳米技术等。 蛋白(绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白)的载体中,共转染到功能细胞中(一般选用 COS7 细胞)表达带有荧光的融合蛋白.这样,相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光,可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行精确细胞定位或共定位时,必须用共聚焦荧光显微镜观测.因为共聚焦荧光显微镜(相当于医院给病人诊断的 CT)观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色,就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象,无法确定蛋白质共定位现象.在进行定位或共定位同时,也可以对细胞核进行染色.这样,在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.上面介绍的活细胞定位,其优点是表达的荧光蛋白荧光强,没有背景,观测方便.
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中压制备色谱仪是一种在化学、生物制药等领域中广泛应用的分离设备,主要用于从混合物中高效分离和纯化目标物质。为了确保分离过程的准确性与效率,检测仪器在色谱系统中起到了关键作用。本文将深入分析在中压制备色谱仪中常用的检测仪器类型及其适用场景,帮助用户选择合适的检测方案,从而优化实验结果。
一、紫外-可见光检测器(UV-Vis)
紫外-可见光检测器是中压制备色谱系统中常见的检测器之一,特别适用于检测具有紫外吸收特性的化合物,如芳香族化合物或含共轭双键的分子。UV-Vis检测器不仅灵敏度高,而且结构简单,易于操作。它通常支持多波长检测,能够在制备过程中实时监控不同化合物的分离情况。用户可以通过选择特定波长,针对目标物质实现高效分离。
二、示差折光检测器(RID)
对于没有明显紫外吸收特性的化合物,如糖类、多糖及某些脂质,示差折光检测器(RID)是理想选择。RID通过检测样品和流动相的折光指数差异实现检测。这种检测器虽然灵敏度相对UV-Vis较低,但在非吸光性化合物的分析中表现出色。其应用领域包括食品分析及多糖纯化过程。由于RID对流动相成分的变化较为敏感。
三、蒸发光散射检测器(ELSD)
蒸发光散射检测器(ELSD)适用于检测难以用UV-Vis和RID监测的化合物,如脂类、聚合物和部分碳水化合物。其工作原理是将样品中的流动相蒸发,然后通过光散射检测样品残留的非挥发性物质。ELSD具备较宽的检测范围,且对大多数化合物表现出良好的通用性,因此在天然产物的分离和药物分析领域中应用广泛。不过,ELSD的操作要求较高,需优化气流、温度等参数才能获得理想的检测效果。
四、质谱检测器(MS)
质谱检测器(MS)是一种灵敏度极高的检测工具,能够提供目标分子的分子量及结构信息。在复杂样品的分离过程中,MS可结合色谱仪用于追踪目标化合物并进行定性和定量分析。虽然MS的操作较为复杂,且需要专业人员维护,但其强大的检测能力使其在高端制药和科学研究领域中得到了广泛使用。质谱检测器还可用于鉴定未知物质,在分离纯化中的应用前景十分广阔。
五、荧光检测器(FLD)
荧光检测器(FLD)利用荧光分子在特定波长下发射荧光信号的特性进行检测。这类检测器的灵敏度极高,适用于检测微量且具有荧光特性的化合物,如多环芳烃或蛋白质标记物。FLD检测范围的限制较大,但在环境监测、食品分析及生物制药领域中,对于某些特殊化合物的检测不可或缺。
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