生物缓冲液生物实验中需要配制哪些缓冲液

蛋白质的结构和功能需要在合适的pH值环境中才能维持，因此在蛋白的制备及纯化过程中，生物缓冲液的选择非常重要，只有合适的缓冲液才能保证蛋白的活性和结构稳定。

蛋白纯化过程缓冲液作用

用于蛋白纯化的缓冲剂有很多种，在维持体系的pH同时，要保证蛋白在纯化过程中不能失活，或者是尽量减少蛋白失活的量，在蛋白纯化的每一个步骤中都要保持蛋白的可溶性和活性。

蛋白纯化缓冲液要求

蛋白纯化过程中的缓冲液既要防止蛋白降解，也要防止蛋白聚合，其对实验结果影响显著。在选择和试剂缓冲液时应考虑以下几个因素：pH值、缓冲体系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据所纯化的目标蛋白进行优化，并以目标蛋白的活性作为优化的评估标准。

了解蛋白稳定性条件

蛋白的种类很多，不同的蛋白适应的pH值有差异，需根据其最适pH值来选择缓冲液。很多时候采用的是pH是7.4，这是模仿的生物条件，大多数蛋白在这个pH值下是稳定的。不过也有一些是例外的，这就需要调整pH值，以保持蛋白是可溶的且不会降解。

蛋白纯化常用的缓冲剂

蛋白纯化过程中常用的缓冲液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等，其中普遍的是用Tris，它的缓冲范围接近生理pH值，且有着较低的离子强度，是蛋白质的良好溶剂，能保证蛋白的稳定性。需注意的是配制缓冲液时，尽量避开目标蛋白的等电点pl。因为蛋白在其等电点的pH溶液中表面没有静电荷，带百分子间排斥力减小，容易聚集，溶解度降低。

现在需纯化的蛋白的适应pH值、等电点、以及缓冲液的缓冲范围都是可以查到的，直接按对应要求匹配即可。德晟是体外诊断试剂生产型企业，可提供大包装的生物缓冲剂Tris、MOPS、Bicine等。

酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质，其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子，需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。

1. 生物缓冲液，包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等，其中Tris的缓冲体系应用较为普遍，缓冲能力比较强，同时对蛋白有良好的溶解性，为蛋白提供合适的pH环境。

2. 盐类，主要是氯化钠，调节蛋白缓冲液的离子强度（类似盐浓度）。通常配制时，需较少的离子强度防止蛋白沉淀；但需要将蛋白脱离出来时，应增加离子强度，否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合。

3. 表面活性剂：吐温20、Triton X-100等，改变缓冲溶液表面张力，增加试剂相容性。

4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等，惰性蛋白如Casein（酪蛋白），防腐剂如叠氮钠、卡松（异噻唑啉酮混合物）等。

蛋白缓冲液选择优化

虽然蛋白缓冲液的基本组成类似，不过没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外，蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时，蛋白最不稳定，容易聚集沉淀。

蛋白缓冲液的稳定作用

蛋白缓冲液中添加有糖，对包被蛋白的稳定性有重要作用，减缓蛋白老化作用，并增加亲水性；添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性，惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中，需用沉淀剂（醇）降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带有的静电。

这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的，改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤，前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家，生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。

HEPES中文名：羟乙基哌嗪乙磺酸 分了式：C8H18N2O4S。HEPES 它是一种两性离子有机化学缓冲剂，对细胞无毒性作用，同时它也是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的PH值范围，在PH值为7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。

HEPES的使用方法有两种:

1、按照所需浓度直接加入到配置的培养溶液中，过滤除jun，每1000毫升培养液中加入2.38克HEPES，溶解后用1N NaOH调 PH至7.2，过滤除jun后可使用。此时 HEPES的使用浓度为10mmol/L。  

2、配成100x贮存液(1mol/L)，取23.8gHEPES溶于90ml的双蒸水中，用1NNaOH调PH至7.5-8.0，然后用水定容至100ml,过滤除jun分小瓶装，4摄氏度至20摄氏度保存。使用前取99ml培养液加入1ml贮存液终应用浓度仍为10mmol/L。

HEPES是一种两性缓冲液，溶于水，不与金属离子形成稳定的配合物，其在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。多数情况下，不会干扰生物化学过程，可广泛应用于多种生物化学反应：

1、HEPES常用于各种类型生物体的细胞培养基中用作缓冲试剂，细胞-细胞黏附，细胞短期聚集培养，清洗组织、细胞所用缓冲液；

2、在蛋白质研究中，PIPES常用作阳离子交换色谱法中结合缓冲液的组分和洗脱习液； 

3、在DNA研究中，PIPES用作磷酸钙和 DNA沉淀物形成体系的绥冲滴 AFM以及电穿孔实验中的缓冲液。

德晟生化是一家专业生产生物缓冲剂的厂家，产品种类很多。2005年成立至今已经有十几年的研发生产经验，德晟所生产的HEPES缓冲剂，纯度高、适用范围广。如有需要欢迎与我们取得联系！