75%乙醇，在植物基因组dna的提取试验中什么作用

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  zky914 2017-11-03 00:00:00

  同物（植物、物、微物）基组DNA提取所同; 同种类或同种类同组织其细胞结构及所含同离差 异提取某种特殊组织DNA必须参照文献经验建立相应提取， 获用DNA尤其组织糖酶类物质随酶切、PCR反应等较强YZ作用，用富含类物质材料提取基组DNA， 应考虑除糖酚类物质 本实验水稻幼苗材料，习基组DNA提取般 DNA 、材料 水稻幼苗 二、设备 移液器冷冻高速离机台式高速离机水浴锅陶瓷研钵50ml离 管（盖）及5ml1.5ml离管弯钩状玻棒 三、试剂 1、提取缓冲液?：100mmol/L Tris?Cl， pH8.0， 20mmol/L EDTA， 500mmol/L NaCl， 1.5% SDS 2、提取缓冲液?：18.6g葡萄糖6.9g二乙基二硫代碳酸钠6.0gPVP240ul巯基乙醇加水至300ml 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液：配见第章 5、其试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc 四、操作步骤： （）水稻幼苗或其禾木科植物基组DNA提取 1. 50ml离管加入20ml提取缓冲液?， 60?水浴预热 2. 水稻幼苗或叶5-10g， 剪碎， 研钵加液氮磨粉状立即倒入预热 离管， 剧烈摇混匀， 60?水浴保温30-60钟(间，DNA产量高)， 摇 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液， 颠倒混匀(需带手套， 防止损伤皮肤)室温静置5-10钟， 使水相机相层(必要重新混匀) 4. 室温5000rpm离5钟 5. 仔细移取清液至另50ml离管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温放置片刻即现絮状DNA沉淀 6. 1.5ml eppendorf加入1ml TE用钩状玻璃棒捞DNA絮团，干净吸水纸吸干，转入含TE离管，DNA快溶解于TE 7. DNA形絮状沉淀，则用5000rpm离5钟， 再沉淀移入TE管收集沉淀，往往难溶解于TE，60?水浴放置15钟帮助溶解 8. DNA溶液3000rpm离5钟， 清液倒入干净5ml离管 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl)， 37? 10钟， 除RNA(RNADNA操作、析般影响省略该步骤） 10. 加入1/10体积3mol/L NaAc及2×体积冰乙醇，混匀，-20?放置20钟左右，DNA形絮状沉淀

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