氨基酸纸层析喷茚三酮显色时应注意些什么

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  5300110 2016-09-27 00:00:00

  氨基酸纸层析喷茚三酮显色时应注意些什么 氨基酸的纸层析 一、 实验目的 1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法.2.学习纸层析法的操作技术，分析未知样品氨基酸的成分.二、 实验原理 用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，它是分配层析法的一种.纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成.滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团，可吸附有机溶剂中的水作为固定相，有机溶剂作为流动相，它沿滤纸自下向上移动，称为上行层析；反之，使有机溶剂自上而下移动，称为下行层析.将样品点在滤纸上进行展层，样品中的各种氨基酸即在二相中不断进行分配，由于它们各自的分配系数不同，故在流动相中移动速率不等，从而使不同的氨基酸得到分离和提纯.纸层析法主要是依据混合组分对二相分配系数的差异进行分离，但亦存在着某种程度的吸附作用和离子交换现象.氨基酸经层析在滤纸上形成距原点不等的层析点，氨基酸在滤纸上的移动速率用Rf 表示.Rf = 原点到层析斑点ZX的距离/原点到溶剂前沿的距离 只要实验条件(如温度、展层溶剂的组分、pH、滤纸的质量等)不变，Rf 值是常数，因此可做定性分析参考.如果溶质中氨基酸组分较多或其中某些组分的Rf 值相同或近似，用单向层析不宜将它们分开，为此可进行双向层析，在diyi溶剂展开后将滤纸转动90度，以diyi次展层所得的层析点为原点，再用另一种溶剂展层，即可达到分离目的.由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析点显色，从而定性和定量.三、仪器和试剂 仪器 层析滤纸、烧杯、剪刀、层析缸、培养皿、猴头喷雾器、微量加样器或毛细管、吹风机一个、直 尺、铅笔等.试剂 1.混合氨基酸溶液(水解后的氨基酸干粉) 甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶于5mL 水中.蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶于5mL 水中.亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶于5mL 水中.氨基酸混合液：甘氨酸50mg，亮氨酸25mg，蛋氨酸25mg 共溶于5mL 水中.2.展层溶剂 碱相溶剂：

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