多少周icr小鼠超排然后合笼取体内胚胎比较好

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  廖冰6 2016-09-22 00:00:00

  1材料和方法 1.1材料ICR和C57BL/6小鼠.所有实验用小鼠均在SPF动物房饲养，温度控制在℃，光控，自由采食.Co60灭菌饲料；孕马血清，46~48h后给供体鼠注射hCG，hCG注射当日下午和雄鼠合笼，次日6：30~8：00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配. 1.2.1.2受体鼠的预备实验开始前提前预备输精管结扎雄鼠，挑选至少两次和雌鼠交配后都不能使其受孕的结扎雄鼠备用.实验第3日下午合笼受体鼠和结扎雄鼠，次日06：30～08：00检查雌鼠有无阴栓以判定是否已经交配，交配成功的雌鼠作为胚胎移植的受体鼠. 1.2.1.3受精卵的收集处死供体鼠，打开腹腔，取出输卵管.将输卵管置于M2培养液中，用小镊子撕开输卵管膨大部，可见有卵团溢出，用吸管〔5-6〕将卵团转移至含有透明质酸酶的M2培养液滴中，吹吸数次，洗掉卵细胞四周的泡沫细胞.将受精卵转移至含有M16培养液滴的培养皿中，37℃，50mL/LCO2培养箱内短暂培养. 1.2.2胚胎移植方法将106只受体雌鼠随机分为两组，其中一组采用传统的胚胎移植方法〔4〕；另一组采用改进的胚胎移植方法. 1.2.2.1传统的胚胎移植方法〔4〕用水合氯醛麻醉受体鼠，沿受体鼠背部中线Z后一根肋骨水平切1cm左右切口，轻轻拨开切口，可见位于卵巢上方的白色脂肪垫.用小镊子夹住白色脂肪垫将其拉到体外，用小血管夹夹住，并靠其重力起固定作用，以防输卵管缩回体腔.用移卵管吸15～20个受精卵预备移植.将小鼠转到解剖镜下仔细寻找到输卵管.可见输卵管被一层呈半透明的囊膜所包绕，将囊膜撕破而暴露输卵管，将移卵管内受精卵移植到输卵管膨大部.

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