请问细胞转染质粒后想获得稳定细胞系，是先用流式细胞仪筛选后再用抗

晚期肾病（ESRD）患者接受免疫抑 制剂的治 疗后，能够在体内维持一种免疫平衡的状态，此时的T细胞的免疫功能状态已经有过系统的研究了，但是B细胞的免疫功能状态还未有过系统的研究。

尽管免疫抑制剂主要作用于T细胞，但是考虑到免疫抑制剂过量使用时会造成病毒的机会感染，表明其对B细胞仍然有一定的影响，因而本文即将介绍的一篇文章就对肾移植后服用免疫抑制剂后的患者体内的B细胞亚群及功能状态做了阐明。

本研究选择了2012-2016年间接受肾移植的103名病人，入组了其中73位处于未排斥且未感染的免疫平衡状态的病人，作者将其分成了2组，一组34人为接受移植后一年，另一组39人为移植后五年，同时还入组了35名未接受移植的肾透析ESRD病人和36名参与健康体检的健康对照。

为详细描绘B细胞的免疫分型及功能状态，本文使用了8种流式抗体进行染色，抗体的详细信息如下：

此Panel为贝克曼公司推出的Duraclone IM全套抗体组合方案中的第2种（货号B53318）。该产品的优点是粉末装，保存的时间比液体更久；而且预混抗体也能节省实验时间，相比于自己混匀抗体后分装染色，样本间的一致性会更高。产品质量满足ISO 9001认证标准（ISO 9001-2008）。

所有样本染色好后使用贝克曼库尔特的3激光13色流式分析仪CytoFlex分析。本仪器可以轻松做到10色以上的流式分析，本文使用的8色Panel，检测分析起来较为简单。

文章检测完所有样本之后，使用的圈门策略模式图如下图所示。

研究发现，总的B细胞比例在病人体内明显下降，但是不同组的病人之间没有显著差异，说明B细胞比例的降低并不是免疫抑制剂造成的，而有可能是晚期肾病的临床表现之一。

随后对B细胞的细分亚群及功能状态进行分析，如以下各图所示。

可以看到，使用Duraclone IM全套抗体组合方案种的B细胞亚群试剂（货号B53318）和Beckman CytoFlex流式仪检测得到的流式结果图，分群清晰明了，这对于后面结果的判断十分重要，流式图分群清晰才能使后续的结论更可信。

总的来说，肾移植后的病人Breg(CD38hiCD27+CD24+)、过渡型B细胞(IgM+CD38hiCD24hi)、边缘区B细胞(IgD-CD27+)、亚型转换记忆B细胞(IgM-IgD-CD38lowCD27+)比例降低，而非转换记忆B细胞(IgM+IgD+CD38lowCD27+)比例升高，浆细胞(CD38hiCD27+CD24-)的比例在ESRD病人中最 高，CD38lowCD21- B细胞比例在移植后5年病人组最 高 。即主要的B细胞亚群都在病人和健康人组之间有差异，但是肾透析和肾移植组的病人之间则很少有差异。由此可以说明，肾移植组病人的这些B细胞亚群的差异，并不是由于免疫抑制剂造成的，而主要是晚期肾病的临床表现。

如果读者对于B细胞的每种细胞亚群的详细功能有疑问，可以详细查看2019年发表于Frontiers in Immunology上的一篇综述【1】，详细解释了B细胞的亚群怎样细分以及每种细胞亚群的功能，相信对于读者会有一定的启示意义。

文章来源： 

Q. Zhuang, H. Li, M. Yu, et al., Profiles of B-cell subsets in immunologically stable renal allograft recipients and end-stage renal disease patients, Transplant Immunology(2018), https://doi.org/10.1016/j.trim.2019.101249

B细胞分群及功能的参考文献： 

【1】 Sanz I, Wei C, Jenks SA, Cashman KS, Tipton C, Woodruff MC, Hom J and Lee FE-H (2019) Challenges and Opportunities for Consistent Classification of Human B Cell and Plasma Cell Populations. Front. Immunol. 10:2458. doi: 10.3389/fimmu.2019.02458