液相色谱柱种类

液相色谱柱的误区

 在液相色谱上遇到的问题有很多，例如HPLC 色谱柱的一些常见问题时有出现，可能会令很多实验员感到非常沮丧。那么今天，恒谱生带您了解这些是什么以及如何解决它们可以让您避免数小时的挫败感。

一、无峰值：

       可能有多种因素会导致 HPLC 输出中不出现峰或出现非常小的峰。正常读数应该又大又细的峰值，高度也是会有不一样的。小峰或没峰可能代表检测器灯已关闭，没有流动相流量和样品丢失或变质，或者检测器、积分器、进样器阀或记录器这些有问题存在。

     其实先要确保探测器是打开状态，然后检查所有连接情况。确保自动进样器样品瓶中有足够的液体和样品中无气泡情况出现，并使用新的标液重新进行系统的检查。

二、无流量：

       如果没有出峰，很有可能是HPLC 色谱柱中没有流量；也可能意味着泵已关闭或流量因某种原因中断或受阻；同时泵头中也可能存在泄漏或空气滞留。

       如果泵关闭，需要启动泵并检查储液器中的流动相液位和整个系统的流量情况。检查样品环是否有其他障碍物或气塞，并确保流动相组分可混溶且流动相是否能够进行正常脱气。继续检查系统松动情况，检查泵是否有泄漏等其他问题。

三、压力问题：

      要是压力低于平常或无压力这有可能是系统某处发生泄漏或空气滞留；要是系统压力过高，那么泵、进样器、在线过滤器、保护柱、分析柱或管路都可能有问题。

      如果是检查发现是低压，那就要检查整个色谱系统是否存在泄漏、泵密封件故障或阀门损坏的情况等。如果是高压的话，先从移除保护柱和分析柱，并用接头替换，将进样器重新连接到检测器。以 2-5 mL/min 的速度运行泵，并开始查找原因，。如果问题是出现在分析柱上，请在分析柱与检测器断开连接时反转，并冲洗色谱分析柱；在必要的时候更换入口滤芯或更换柱子。

四、裂峰：

       如果发现峰出现在中间下降形成M形，那么可能是分析柱入口可能存在一些污染；也可能在色谱柱入口处有筛板被堵塞了或存在了不均匀的空隙；还有可能是样品溶剂与流动相不相容。

       如果是入口处有污染，请反转并冲洗色谱柱，并在需要时更换筛板。还可以用具有相同键合相功能的薄膜颗粒重新填充色谱柱顶部，并继续以反向流动方向使用色谱柱；如果是问题出在样品上，请调整流动相中的样品，因为样品和流动相中的 pH 值差异会导致分峰。

五、尾峰和前峰：

       发现峰不是直线上升和下降，而是开始在前面或后面就形成轻微的倾斜，则称为前端或尾部。这通常可能是保护柱或分析柱受损或是色谱柱过载。如果有拖尾峰，请先移除保护柱并尝试分析，必要时就需要更换。如果需要恢复或更换分析柱。一定要检查流动相的组成和色谱柱的性能。有前峰的话，请尝试注入更小的体积或稀释样品；如果溶剂有问题请调整溶剂，并使用 50 柱体积的 HPLC 级乙酸乙酯以标准流速的两倍或三倍冲洗极性键合相柱，然后在开始分析之前使用中等极性溶剂。

       今天恒谱生分享的知识先到这啦，希望对您的工作有所帮助！