怎样防止elisa洗板时孔间污染

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  qwekkll 2017-08-29 00:00:00

  在做ELISA实验时，洗板有两种方法：手工法洗板和洗板机洗板。二者没有本质的差别，只要操作合乎要求，均能得到正确、可靠的结果。手工洗板是每次反应温育后，将反应液吸出或甩干，然后在板孔中加满洗液，放置2～3 min后，将洗液吸出或甩干再在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤3～4次，Z后在吸水纸上拍干即可。手工洗板人为因素比较大，实验人员必须经验丰富，洗涤次数要足够，冲击力又不要太大，加入的洗液量以刚满反应孔为限，防止孔口内有游离酶未能洗净，同时防止孔与孔之间液体交叉。洗涤结束后扣干亦非常重要，否则易造成假阳性。每次洗完板后，在吸水纸上轻轻拍干，拍板时要垂直，避免交叉感染。用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离;吸水纸要一次性使用，应使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。酶结合物不耐干燥，特别在较高的温度下更易失活，所以拍干的反应板应尽量缩短在空气中暴露的时间，时间越长，吸光度值越低。洗板机洗板是将手工操作改由洗板机进行，人为因素少，速度快，条件恒定，但是使用洗板机洗板的一个特点是，每次洗板后不能拍干，故有较多的液体残留，需增加洗板次数来减少这种误差。洗板机洗板次数越少，假阳性越高，本实验中，洗板1次，假阳性率高达90%;洗板2次，假阳性率为38%;洗板3次，假阳性率为2%;洗板4～5次，未出现假阳性。洗板次数并非越多越好，太多不但浪费人力、物力，并且也会导致假阴性结果，所以一般试剂盒要求洗板4～5次即可。洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出。为了洗涤效果较好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1～2次，能达到理想的洗涤效果。

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