茶叶中农药残留的测定有哪些方法

       2020年《国家食品安全监督抽检实施细则》(简称国抽)与2019年相比，在茶叶的检验项目中，删除了除虫脲、多菌灵、甲氰菊 酯、滴滴涕和特丁硫磷的检测，新增了内吸磷、乙酰甲胺磷、丙溴磷、毒死蜱和莠去津的检验项目。

导读

　　迪马科技按照2020年版国抽细则的要求，参考《GB 23200.13-2016 食品安全国家标准 茶叶中448种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法》、《GB/T 23204-2008 茶叶中519种农药及相关化学品残留量的测定 气相色谱-质谱法》、《GB 23200.113-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》、《SN/T 4655-2016 出口食品中草甘膦及其代谢物残留量的测定方法 液相色谱-质谱/质谱法》等相关标准，采用SPE、QuEChERS结合GC-MS、UPLC-MS/MS建立了一系列茶叶中农药残留的检测方法，系列方法中涵盖了所有2020版国抽细则中茶叶检验项目下的农药，可供广大分析工作者参考！

方法汇总

SPE-UPLC-MS/MS法

克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、氧乐果、啶虫脒、吡蚜酮、吡虫啉和内吸磷(O+S)

QuEChERS-UPLC-MS/MS法

克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敌百 虫、氧乐果、啶虫脒、吡虫啉和内吸磷(O+S) 

SPE-GC-MS法

内吸磷(O+S)、灭线磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亚砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯杀螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、联苯菊酯、氯氰菊酯和GX氯氰菊酯、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯

SPE-UPLC-MS/MS法

氨甲基膦酸和草甘膦

方法一：SPE-UPLC-MS/MS法

01 适用范围

本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、氧乐果、啶虫脒、吡蚜酮、吡虫啉和内吸磷(O+S)的检测。

02 标准品配制

(1) 单标储备液1.0 mg/mL: 准确称取适量各标准品，用乙腈配制成1.0 mg/mL的单标储备液；

(2) 混标储备液5.0 μg/mL: 分别吸取各单标储备液，用乙腈配制成5.0 μg/mL混标储备液；

(3) 混标中间液1.0 μg/mL: 吸取混标储备液，用乙腈配制成1.0 μg/mL混标储备液。

03 提取

(1) 取10.0 g样品，加入30 mL乙腈，振荡5 min，6000 rpm离心5 min，取出上清液；

(2) 向下层残渣中继续加入30 mL、20 mL乙腈，按照步骤(1)重复提取两次；

(3) 合并三次提取液，在40 ℃水浴中减压蒸至1 mL，加入乙腈复溶，并转移到具塞试管中定容至5 mL，取出1 mL，待净化。

04 净化

 ProElut TPC 12 mL (Cat.# 65354)

(1)活化：加入10 mL乙腈-甲苯(3-1)活化，弃去流出液；

(2)上样：加入1 mL待净化液，收集流出液；

(3)洗脱：加入25 mL乙腈-甲苯(3-1)，收集流出液，合并(2)和(3)流出液；

(4)重新溶解：将流出液在40 ℃水浴中旋转浓缩至约0.5 mL，然后在室温下用氮气缓慢吹干，加1 mL甲醇溶解，上机分析。

注:  同方法制备基质匹配标准溶液

05 分析条件

5.1 UPLC 条件

色谱柱: Leapsil C18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (Cat#: 86005)

流  速: 0.4 mL/min

进样量: 1 μL

柱  温: 35 ℃

流动相: A: 0.1%甲酸水    B: 乙腈

梯度设置

5.2 质谱条件

电离模式: ESI

扫描方式: 正离子扫描

检测方式: 多反应监测

电喷雾电压: 5500 V

雾化气压力: 50 psi

辅助气压力: 50 psi

气帘气压力: 20 psi

离子源温度: 500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

06 添加回收结果

绿茶中10种农药残留检测的添加回收结果(%)

图1 10 种农药标准品20.0 μg/L的MRM色谱图

方法二：QuEChERS-UPLC-MS/MS法

01 适用范围

本方法适用于茶叶中的克百威、灭多威、3-羟基克百威、茚虫威、甲胺磷、乙酰甲胺磷、敌百 虫、氧乐果、啶虫脒、吡虫啉和内吸磷(O+S)的检测。

02 标准品配制

(1) 单标储备液1.0 mg/mL: 准确称取适量各标准品，用乙腈配制成1.0 mg/mL的单标储备液；

(2) 混标储备液5.0 μg/mL: 分别吸取各单标储备液，用乙腈配制成5.0 μg/mL混标储备液；

(3) 混标中间液1.0 μg/mL: 吸取混标储备液，用乙腈配制成1.0 μg/mL混标储备液。

03 提取

(1) 取2.0 g样品，加入10 mL水混匀，浸泡30 min；

(2) 继续加入15 mL 乙腈，振荡5 min；

(3) 加入6 g 无水硫酸镁和1.5 g乙酸钠(Cat#: 64520S)，振荡1 min，6000 rpm离心5 min；

(3) 取出8 mL上清液，待净化。

04 净化

ProElut QuE 15 mL Tube (Cat#: 64622)

将待净化液加入到15 mL ProElut QuEChERS净化管，涡旋混合1 min，6000 rpm离心5 min，准确取2 mL上清液于5 mL氮吹管中，40 ℃水浴中氮气吹至近干，加入1 mL甲醇，混匀，上机分析。

注:  同方法制备基质匹配标准溶液

05 分析条件

5.1 UPLC 条件

色谱柱: Leapsil C18，100 x 2.1 mm，2.7 μm (Cat#: 86005)

流  速: 0.4 mL/min

进样量: 1 μL

柱  温:  35 ℃

流动相: A: 0.1%甲酸水    B: 乙腈

梯度设置

5.2 质谱条件

电离模式: ESI

扫描方式: 正离子扫描

检测方式: 多反应监测

电喷雾电压: 5500 V

雾化气压力: 50 psi

辅助气压力: 50 psi

气帘气压力: 20 psi

离子源温度: 500 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

06 添加回收结果

绿茶中11种农药残留检测的添加回收结果(%)

图1 11种农药标准品13.3 μg/L的MRM色谱图

方法三：SPE-GC-MS法

01 适用范围

本方法适用于茶叶中内吸磷(O+S)、灭线磷、甲拌磷、莠去津、氯唑磷、甲拌磷亚砜、甲拌磷砜、毒死蜱、三氯杀螨醇、水胺硫磷、丙溴磷、联苯菊酯、氯氰菊酯和GX氯氰菊酯、氰戊菊酯和S-氰戊菊酯的检测。

02 标准品配制

(1)单标标准储备液: 准确称取各农药标准品于10 mL容量瓶中，用甲苯溶解，并定容至刻度；

(2)混合标准储备液: 根据测定需要，吸取适量体积的单标标准储备液于50 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；

(3)混合标准中间液1: 吸取5 mL混合标准储备液于10 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度；

(4)混合标准中间液2: 吸取1 mL混合标准储备液于10 mL容量瓶中，并用乙酸乙酯定容至刻度。

03 提取

(1)取5.0 g样品于50 mL离心管中，加入15 mL乙腈，振荡5 min，8000 rpm离心5 min，收集上层清液；

(2)向下层残渣中再加入15 mL乙腈，按步骤(1)重复提取一次，合并上清液；

(3)将上清液在40 ℃水浴下减压蒸至约1 mL，加入6 mL乙腈-甲苯(3-1)溶解，待净化。

04 净化

ProElut TPC 12 mL (Cat#: 65354)

(1)活化：加入10 mL乙腈-甲苯(3-1)，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，收集流出液；

(3)洗脱：加入25 mL乙腈-甲苯(3-1)，合并(2)和(3)流出液；

(4)重新溶解：将洗脱液在40 ℃水浴下减压蒸干，用乙酸乙酯定容至1 mL，混匀，供GC-MS分析。

注:  同方法制备基质匹配标准溶液。

05 GC-MS条件

色谱柱：DM-5MS, 30 m × 0.32 mm × 0.25 μm (Cat.# 8231)

进样口温度: 240 ℃

升温程序: 初始温度70 ℃，保持2 min，以25 ℃/min升温至150 ℃，再以3 ℃/min升温至200 ℃，再以8 ℃/min升温至280 ℃，保持12 min

载气: 氦气，柱流速: 1.46 mL/min

进样方式: 不分流进样

进样量: 1.0 μL

离子源温度: 230 ℃

接口温度: 280 ℃

溶剂延迟: 6 min

电子轰击电离源(EI): 选择离子监测模式(SIM)，分组监测见下表

选择离子监测组表

06 添加回收结果

绿茶和红茶中多种农药残留量的GCMS检测添加回收结果

14种农药残留标准(10 ug/mL)TIC图

方法四：SPE-UPLC-MS/MS法

01 适用范围

本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1 mg/kg。

02 标准品配制

单标标准储备液: 准确称取各标准品，用水配制成1000 μg/mL的单标标准储备液。

混标标准中间液: 分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 μg/mL、10 μg/mL和50 μg/mL的混标标准中间液。

03 提取

取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。

04 净化

ProElut GLY 6 mL (Cat.#:  65938)

(1)活化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；

(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 μm尼龙滤膜，上机分析。

注: 同方法制备基质匹配标准溶液。

05 UPLC-MS/MS条件

5.1 UPLC 条件

色谱柱: Dikma Polyamino HILIC, 150 × 2.0 mm, 5 μm (Cat.#: 99302)

流  速: 0.2 mL/min

进样量: 10 μL

柱  温: 35 ℃

流动相: A: 乙腈 B: 5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11

梯度设置:

5.2 质谱条件

电离模式: ESI

扫描方式:   负离子扫描

检测方式:   多反应监测   

电喷雾电压:   -4500 V

雾化气压力:   60 psi  

辅助气压力:   60 psi

气帘气压力:   35 psi   

离子源温度:   550 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

06 添加回收结果

茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果

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