什么是主流的细胞存活率测试

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  15842062061 2019-04-19 17:19:11

  <p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">细胞计数和存活测试</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">1. 原理：</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">1.1. 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">1.2. 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm2 大正方形，其中4 个角落之正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml 中之细胞数目。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">1.3. 存活测试之步骤为dye exclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue 染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2. 材料：</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.1. 0.4 % w/v trypan blue (GibcoBRL 15250-061)</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.2. Erythosin bluish stain</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">取0.1 gram Erythrosin bluish (Sigma E-9259) 及0.05 gram preservative methyl</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">paraben (Sigma H-3647) 溶于100 ml Ca++/Mg++ free saline</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.3. 血球计数盘及盖玻片(Hemocytometer and coverslip)</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.4. 计数器(counter)</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.5. 低倍倒立显微镜</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">2.6. 粒子计数器(Coulter counter, Coulter Electronics)</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">3. 步骤：</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">3.1. 取50ml 细胞悬浮液与50ml trypan blue (or Erythrosin bluish) 等体积混合均匀于1.5ml 小离心管中。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">3.2. 取少许混合液(约15ml) 自血球计数盘chamber 上方凹槽加入，盖上盖玻片，于100 倍倒立显微镜下观察，活细胞不染色，死细胞则为蓝色(或红色- Erythrosin bluish)。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">3.3. 计数四个大方格之细胞总数，再除4，乘以稀释倍数(至少乘以2，因与trypan blue 等体积混合)，Z后乘以104 ，即为每ml 中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上，只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。</p><p style=" font-family:&#39;Microsoft YaHei&#39;;font-size:16px;line-height: 2em;position: relative;">4 大格*细胞总数x 2 x 104 / 4= 细胞数/ml</p><p><br/></p>

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