色谱峰分叉是什么原因

液相色谱仪出峰不佳，峰分叉的原因

做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰，

很多时候，

这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题。

今天我们就一起看看导致峰分叉的原因，

以及如何解决这个问题。

首先，我们需要判断，

这到底是一个峰，还是两个峰?

a图主峰前面有一个肩峰，

这到底是峰形不好，

还是另外一个化合物没分开呢?

判断方法

降低该成分在样品中的浓度

b图是降低该成分浓度后，

进样后得到的色谱图。

如果这是一个峰，

那肩峰也应该响应变小，

但是这个例子里，

肩峰没有变小，

这应该是另外一个化合物。

这时候，我们就要考虑如何改变方法

将这两个东西分开。

如果所有峰的峰形都不好

一般来说，

一个样品都会出多个峰。

峰形不好，绝大多数时候

在每个峰上面都会出现。

比如像下面这样：

a图是所有峰都拖尾，

b图是所有峰都有肩峰，

也可以说峰分叉，

这种情况一般都是色谱柱头塌陷

或者柱头的筛板被堵导致的。

为什么会导致峰形问题呢？

请看下面的图

a图是正常的柱头，

b图是筛板被堵的柱头。

正常情况下，

所有样品分子都是均匀通过色谱柱，

形成一个对称的峰形。

堵塞的情况下，

有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰，

导致时间拖后，形成拖尾。

对于色谱柱塌陷的情况，

用同样的方法大家也不难理解。

只不过这时候，

是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些。

如何解决这个问题呢？

1  反冲

柱出口放空，

冲20-30ml流动相。

虽然柱子上都有表明使用方向，

但是对于硅胶基质的色谱柱

基本都可以反冲。

将柱头污染物

如泵密封圈的碎屑，

样品中的污染等冲走，

就能解决问题。

当然，还是要提倡大家注意

样品上机之前的前处理

和及时更换磨损的泵密封圈。

有条件的还是用保护柱，

大不了就换保护柱，

也比换色谱柱强。

2  更换或清洗筛板

现在估计做这个事情的人不多，

但是谁有废柱子，

想练练也未尝不可。

我们一起看看一个实际的例子

根据之前说的，

可能是柱头堵了，

或者塌陷了。

但是进一步检查，

发现另有原因。

方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，

78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，

进样10ul，100%乙腈溶解的样品。

一般来说，

虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好，

但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时，

的确会引起峰形的问题。

我们怎么办呢？

01

从最容易的办法做起，

降低溶剂乙腈的比例，

降到50%看看。

从下图b，4min的峰可以看出，

没啥改观。

02

接下来反冲柱子，

结果如图c，

基本没变化。

算了，明天再说吧。

03

第二天来到实验室，

还能干嘛呢? 

更换筛板?

算了，直接换柱子吧！

结果如d，

噢，好很多噢。

之前柱子肯定有问题，扔了。

但是峰还是有点宽，

估计还是哪儿有问题。

手上忙，没时间管这个。

04

几天过后，

重新配了流动相，

一跑，好了，如图e。

虽然到底什么原因导致之前峰形的问题，

已经无从查找

（柱子扔了，旧流动相也没了），

但是也给我们提供了一个解决问题的步骤：

1

确定峰形问题

是所有峰都有问题，

还是就是某一个峰有问题。

如果所有峰都有问题，

基本都是色谱柱，

或者仪器管路连接的问题。

如果是某一个峰有问题，

那就要从方法上来考虑，

是否需要改变流动相比例，

pH值，色谱柱温度等等。

2

从最简单的做起

从不需要换什么东西的方法做起。

比如改变样品溶剂，

反冲色谱柱等等。

3

换东西

换保护柱，换色谱柱，

换流动相(新配)，

一步一步的换，

有助于找到问题的根本。

4

总结经验

问题解决后，

想想需不需要采取什么措施，

防止类似问题的发生，

比如说常换流动相啦，

及时更换密封圈啦，

记录进样次数

了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。

希望以上信息能够让各位同学

在碰到峰形不好的问题时，

有一些思路，

不至于手足无措。

也欢迎大家留言补充

上面没有提到的可能影响峰形的可能。

更多检测标准解读

专家培训课程

技术经验干货分享

VX关注公众号：安谱实验学堂

荧光检测器无峰是什么原因?

1.3.色谱图中所有峰拖尾或峰变形通常是由物理作用导致的，而非化学作用。

如果色谱图中的峰形均表现相同类型的变形（图3），则问题Z早应出现在分析物通过色谱柱迁移之前（主要问题发生在分析物在色谱柱中迁移之前）。

这种峰形变形Z常见的致因是：玻璃料或柱头的空隙部分堵塞（此类峰变形Z常见的原因是筛板部分堵塞或色谱柱头塌陷）。

除非在推荐的pH范围之外使用色谱柱，否则现在的柱子基本不会受到空隙的影响（轻易不会发生塌陷）。

但是，玻璃料（筛板）堵塞仍然是一个普遍存在的问题。对于5m颗粒柱（的色谱柱），入口端的玻璃料（筛板）通常具有2.0m的孔隙度；对于（颗粒）3m的色谱柱，具有0.5m的孔隙度。
如果颗粒物来自于样品，或颗粒物是因泵密封磨损或流动相到达色谱柱而产生的（磨损的泵密封圈或者流动相颗粒物进入色谱），它们通常会集中在玻璃料上（都聚集在筛板上）。

这些颗粒会影响样品在色谱柱入口端的分流，使得部分样品通过不同的流动路径到达色谱柱，因此会晚于另一部分样品。
由于此时（此位置）未发生分离，因此所有分析物会以相同的方式变形（被扰乱），进而色谱图显示所有峰均具有相似（类似）的峰拖尾或变形。

为了防止（避免）这一问题，如果流动相可能含有颗粒（如缓冲沉淀物或灰尘），应对其进行过滤；并在泵密封严重磨损（导致颗粒物的产生）之前更换新的泵密封（密封圈）。

如果样品含有颗粒碎片（屑），应对样品进行过滤（例如0.5m孔隙度过滤器（微孔滤膜））或对其进行短暂离心（例如5分钟，>1500×g），以去除颗粒。

我们强烈建议在自动进样器下游（之后）安装0.5m孔隙度的串联（在线）过滤器，以过滤任何意外进入HPLC系统的颗粒物。如果串联（在线）过滤器玻璃料（滤片）发生堵塞，系统背压会升高；而更换玻璃料（滤片）十分简单、快速和经济。采用串联（在线）过滤器可显著延长色谱柱的使用寿命，而且经济实惠。

图3. 由于玻璃料或色谱柱空隙被部分堵塞（色谱柱筛板部分堵塞或色谱柱塌陷），色谱图中所有峰形均出现了变形。

荧光检测器出现半峰是什么原因？

液相色谱仪峰面积重复性不佳是什么原因