一柱多用 | 核酸药物全能选手DNAPac RP助你分析mRNA

赛默飞色谱与质谱中国 2022-12-28 12:35:14 113  浏览

• 核酸药物将药物治 疗拓展到了蛋白质之前的基因层面，mRNA 疫苗体液免疫与T 细胞免疫的双重免疫机制，提高了免疫活性。这些优势使得核酸药物成为继小分子药物，蛋白药物，抗体药物后的新一代创新药物。核酸药物特别是mRNA在新冠疫情大流行期间，同样发挥了巨大的作用，在核酸研发生产过程中，质粒纯度测定， mRNA序列确证、mRNA含量测定，mRNA帽子结构确定，mRNA的PolyA测定，mRNA的降解产物的研究等等这些需求，对于分析技术提出了更高要求，专用DNAPac系列反相色谱柱和离子交换色谱柱可以满足这些检测需求。

  
  

  本文重 点分享离子对反相测定原液中mRNA含量的液相方法，方法考虑到mRNA本身存在较为复杂的二级三级结构，对流动相中离子对种类、PH、色谱柱温进行了筛选，进而得到合适的保留对称峰型。

  
  

  01、筛选条件

  
  

  02、图谱展示

  
  

  
  

  
  

  图1. 三种离子对在PH=8.5下的谱图

  
  

  图2. 7.0、8.5和10.5三个PH值下的谱图

  
  

  图3. 柱温40℃、60℃和80℃下的谱图（整体图为右上）

  
  

  03、仪器及色谱方法

  
  

  04、方法稳定性的探讨

  在mRNA分析中可能会遇到一些方法稳定性的问题，比如保留不稳定、灵敏度下降等，除了离子对试剂浓度变化引起之外，色谱柱污染也会导致上述问题。反相分离模式用于mRNA样品的分析常见的污染问题是残留。90%乙腈水做流动相，60℃的柱温下，以运行方法一半的流速清洗色谱柱10-20倍柱体积或者通过进样10 μL 0.1mol/L的氢氧化钠，以分析方法中A和B起始比例为流动相，等度运行5min，柱温和流速保持和方法一致，连续运行1-3针可以很好的解决残留问题。

  
  

  05、结语

  DNAPac RP色谱柱1500A大孔径聚合物微球可以耐受0-14的PH和100℃高温，同时可兼容紫外、MS检测器，非常适合分子量大的mRNA样品的表征，特别是含量测定、3’ PolyA 尾长和5’ Caping结构的确证。在此液相方案中己胺离子对试剂选择性最 好，可参照本文条件，即25mMHAA，PH=8.5-乙腈体系，柱温60℃做一个快速的方法开发。

  
  

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  《DNAPac RP结合Vanquish Flex液相应用于mRNA含量测定》

  
  

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