抗原多肽交联中常见都有哪些问题

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  aifangaini87 2017-03-27 00:00:00

  一、多肽与载体蛋白交联 对在动物体内发生免疫反响而言，大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等交联以后，不仅能添加抗原的巨细，也能增强免疫性。咱们能够提供与KLH和BSA两种蛋白的交联。大多数客户挑选与KLH交联，由于KLH的免疫性非常好，而且BSA在许多试验中作为Blocking试剂，由于动物体内既会发生对多肽的抗体也会发生对载体蛋白的抗体，这么会呈现假阳性。 二、抗体的运用 由于抗体与许多生物分子，以蛋白和多肽等尤为明显，有很强的联系才能，抗体在生物医学研讨中占据共同的主要位置，在对蛋白的特性、含量的测定、散布状况的分析和蛋白的确证等方面都需要用到抗体。例如：确诊试剂盒如早孕试剂盒等，蛋白microalloy、immunohistochemistry 和普通的ELISA试验等。由于抗体有对特定分子很强的联系才能的特点，用抗体进行体内YZ成了许多尽力的方向。成功的典范包含Genetech的Herceptin，用于YZ一类特殊的乳腺癌和IDEC药业公司的Ritaxan，用于特定类型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-细胞。 三、抗原和辨认区域 大多数状况下，antigen和immunogen两个字是能够交换运用的，它们的差别是很小的。他们是别离指一个分子与免疫系统之间的两种类型的相互作用。一个immunogen是指能使一个生物组织的免疫系统发生免疫反响的分子，而一个antigen是指能与这种免疫反响的产品联系的分子，所以immunogen一定是antigen，但antigen纷歧定是immunogen，咱们这儿通用antigen，特指能与免疫反响的产品—抗体联系的分子。 辨认区域（epitopes）是指一个抗原分子中一个与抗体直接联系的一段特定的序列，关于任何抗原（抗原蛋白），很有可能有多个抗体辨认区域，对出产抗体而言，易于抗体辨认的部位的辨认区域Z为理想。 四、进行KLH交联的化学办法 我们用MBS活化KLH，这么能将载体蛋白（KLH）上面的自在-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来，这种办法直接，特异性高，而且安稳，一般挑选对免疫不主要的一端进行交联。 EDC活化载体上的-COOH，将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的办法。但咱们只主张在多肽序列中有多个Cys时采用该办法。如果肽链中含有多个-COOH或-NH2基因，不主张运用该办法，由于会构成多ZD交联的状况，使多肽构造受影响。常用载体蛋白除KLH外，还有BSA，Ovalbumin等，构成KLH的优势是它不搅扰ELISA或Western Blot等试验。 五、对抗原多肽交联适宜的肽链长度 一般主张10-15个残基进行交联。肽链越长，抗体辨认的区域越多，但也就越多时机构成安稳的二级构造。就不再是天然的方式了。太短的肽一般是没有用的，除非有足够的理由，如与有关宗族蛋白或别的蛋白有序列同源性等。 六、KLH交联多肽溶液呈乳状的要素 KLH是一个很大的而且聚合的蛋白。由于它的构造和巨细，它在水中的溶解度是很有限的，因而是乳状，这并不影响它的免疫性，这种混浊的溶液能够直接免疫动物。 七、抗体的产值 抗体的产值取决于许多要素：辨认区域的挑选，多肽的合成，载体的交联，免疫的操作步骤和动物的生理系统等等，因而抗体的产值是不等的。5-25mg都归于正常规模。

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