菌落计数器使用方法

　　菌落计数器在培养皿上计算微生物的数目是一件非常耗时的工作。有了菌落计数器这种仪器，就不必为这项复杂的操作费心了，它可广泛应用在每个生物实验室中。

菌落计数的意义

　　1、菌落是什么

　　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的微生物集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培养基成分培养温度和时间、PH值、需氧性等)所取1ml(g)检样中所含菌落的总数。

　　2、菌落的危害

　　食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。

　　3、菌落计数的单位

　　菌落形成单位叫做CFU。CFU的含义是形成菌落的菌落个数，不等于细菌个数。(比如两个相同的细菌靠得很近或贴在一起，那么经过培养这两个细菌将会形成一个菌落，此时就是2个细菌，1CFU)。

　　菌落计数器采用的是平板计数法，经过培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，国产菌落计数器从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，于是以CFU/ml或CFU/g报告之。

　　4、菌落计数的作用

　　菌落计数器可以判定食品被污染的程度，也可以用于观察细菌对食品污染的程序，还可以用于观察细菌在食品繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。

菌落计数器的操作方法

　　1、将电源插头插入220V电源插座内。将探笔插入菌落计数器上的探笔插孔内。

　　2、将电源开关拨向开，计数池内灯亮。同时显示窗内显示明亮的，表示允许进行计数。

　　3、将待检的培养皿底朝上放入计数池内。用探笔在培养皿底面对所有的菌落逐个点数。此时，菌落处被标上颜色，显示窗内数字自动累加。

　　4、用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。

　　5、显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。

　　6、记录数字后取出培养皿。按复按钮，显示恢复，为另一培养皿的计数做好准备。

菌落计数器的计数原则

　　菌落计数器基本操作一般包括：样品的稀释→倾注平皿→培养48小时→计数报告

　　1、培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算处原始样品中每克(或每ml)中的菌落数，进行报告。

　　2、到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0-4℃，但不得超过24h。

　　3、计数时应选取菌落数在30~300之间的平板(SN标准要求为25~250个菌落)，若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字(有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告)。

　　4、若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取Zgao稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30，则以Zdi稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以Z接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以Zdi稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。

　　5、不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比(同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近)，即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错(有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等)，不应作为检样计数报告的依据。

　　6、当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。

　　7、当计数平板内的菌落数过多(即所有稀释度均大于300时)，但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。

　　8、菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。固体检样以克(g)为单位报告，液体检样以毫升(ml)为单位报告，表面涂擦则以平方厘米(cm²)报告。

菌落计数器的注意事项

　　1、菌落计数器应放置在平整牢固的试验台上使用。

　　2、点数菌落时，探笔不要过于倾斜，轻轻点下至有弹跳感时，数字即被输入。

　　3、菌落计数器应防潮、防强烈震动、防直接日光曝晒、防酸碱侵蚀，用后应加防尘罩。

　　4、注意防止细菌培养物污染计数池。

　　5、菌落计数器及探笔均不得随意拆卸，若发现故障，应请有经验的技术人员检修。

　　6、菌落计数器使用后或放置长时间后放大镜表面会有灰尘，选用纯化水稍清洗，然后用镜头纸擦拭干净待用。