大肠杆菌的检验方法

大肠杆菌（Escherichia coli）大肠埃希氏菌，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为6类：肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）、肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠黏附性大肠杆菌（EAEC）和弥散粘附性大肠杆菌(DAEC).。大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌（G-）。下面就让小编带你了解一下常见的大肠杆菌的检验方法。

制备试验样品：

往装有225mL稀释剂的灭菌均质杯中置入通过无菌操作获取的样品25g，以8000r/min均质1～2分钟，使得比例为1：10的样品匀液制成。（能够替代此操作的方法为使用灭菌乳钵研磨）。

对样品匀液进行稀释，估计样品污染情况，用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液。样品匀液制备到稀释完成这一过程所用的总时长不能大于一刻钟。

EC肉汤以及LST肉汤初筛：

每个样品选出相应适合的三个连续稀释度的样品稀释液。将三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤分别接种到每个稀释度的样品稀释液中，每管接种1mL。将接种管置于温度36±1摄氏度中培养48±2小时。对于试管的产气情况进行观察：对倒管内是否有气泡产生进行检测，向EC肉汤管中使用直径为3毫米的接种环移种所有48±2小时内产气的LST肉汤管培养物。在30分钟内向带盖44.5±0.5摄氏度下水浴箱内置入所有接种的EC肉汤管，培养48±2小时。

伊红美蓝(EMB)平板：

向伊红美蓝(EMB)平板上划线接种产气管的培养物，在温度36±1摄氏度下培养24±2小时。对有没有具备黑色ZX有光泽或无光泽的典型菌落出现进行检测。果果没有典型菌落，那么至少要从平板上挑选两个可疑的菌落。如果有典型菌落，那么至少从每个平板上挑选两个典型菌落。用接种针接触菌落ZX部位往营养琼脂斜面上移种，在温度36±1摄氏度下培养18到24个小时。

生物化学实验

在下列培养基中移种斜面培养，然后进行生化试验。

1.革兰氏染色：

取18小时营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。

2.LST肉汤

将其于温度36±1摄氏度培养48±2小时,对于试管中是否产生气体进行观察。

3.Koser氏枸椽酸盐肉汤：

将其于温度36±1摄氏度培养96小时，对有无生长进行记录。

4.MR-VP培养基：

将其在36±1摄氏度温度下培养48±2小时，通过无菌操作往13毫米×100毫米的试管中移入1mL培养物，将少许肌酸结晶、0.6毫升5％α-萘酚乙醇溶液以及0.2毫升40％氢氧化钾溶液加入，如果有伊红色出现，那么就说明VP试验为阳性。再培养48小时MR-VP培养物的剩余部分，将甲基红溶液滴加5滴，如果培养物变黄色，那么就为阴性反应，如果培养物变红色，那么就为甲基红试验阳性。

5.色氨酸肉汤：

将其在36±1摄氏度温度下培养24±2小时，然后将0.2～0.3mLKovacs氏试剂加入其中，如果上层出现红色，那么就为靛基质阳性反应。