圆二色光谱仪

在蛋白质二级结构的测定方法中，圆二色光谱(简称CD)得到了Z为广泛的应用。在对溶液中蛋白质构象的研究，其比较准确、简单以及快速。其能够在溶液状态下测定，和其生理状态比较接近。并且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，因此，到目前为止，在对蛋白质二级结构的研究中，其占据主导地位，并且已经在蛋白质的构象研究中得到了广泛地应用。圆二色光谱仪为按照圆二色光谱法的原理和测试要求设计制成的仪器。到目前为止目前圆二色光谱法及其仪器已在有机化学、生物化学、配位化学和药物化学等领域得到了广泛地应用，已经成为对有机化合物的立体构型进行研究的一个重要方法。

简介

圆二色光谱为一种用于对非对称分子的构型和构象进行推断的旋光光谱。如果光学活性物质对组成平面偏振光的左旋和右旋圆偏振光的吸收系数(ε)是不一致的，εL≠εR，就会具有圆二色性。若横坐标为不同波长的平面偏振光的波长λ，纵坐标为吸收系数之差Δε=εL-εR，然后使用上述内容作图，得到的图谱就是圆二色光谱，简称CD。如果在紫外可见区域内某手性化合物有吸收，具有特征的圆二色光谱就能够得到。因为εL≠εR，透射光不再是平面偏振光，而是椭圆偏振光，摩尔椭圆度[θ]与Δε的关系为：[θ]=3300Δε。圆二色谱也能够以波长为横坐标，以摩尔椭圆度为纵坐标作图。因为△ε存在正值和负值之分，因此圆二色谱也有呈谷的负性圆二色谱以及呈峰的正性圆二色谱。对有机化合物的构型和构象进行推断为在紫外可见光区域对圆二色谱与旋光谱进行测定的目的。

样品要求

1.缓冲液、溶剂要求：在配制溶液前，要单独的检查缓冲液和溶剂，检查在测定波长范围内是否有吸收干扰，检查是否有沉淀和胶状形成。在蛋白质测量中，缓冲体系经常选择透明性极好的磷酸盐。

2.　样品浓度与池子选择：样品不一样，测定的圆二色光谱范围也会存在差异，对池子大小(光径)的选择和浓度的要求也不相同，通常在相对较稀的溶液中进行蛋白质CD光谱

在蛋白质二级结构的测定方法中，圆二色光谱(简称CD)得到了Z为广泛的应用。在对溶液中蛋白质构象的研究，其比较准确、简单以及快速。其能够在溶液状态下测定，和其生理状态比较接近。并且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，因此，到目前为止，在对蛋白质二级结构的研究中，其占据主导地位，并且已经在蛋白质的构象研究中得到了广泛地应用。圆二色光谱仪为按照圆二色光谱法的原理和测试要求设计制成的仪器。到目前为止目前圆二色光谱法及其仪器已在有机化学、生物化学、配位化学和药物化学等领域得到了广泛地应用，已经成为对有机化合物的立体构型进行研究的一个重要方法。

原理

光为横电磁波，为一种在各个方向上振动的射线。其电场矢量E垂直于磁场矢量H，并且和光波传播方向垂直。因为电场矢量为主要的产生感光的作用，通常光波的振动矢量为电场矢量。光波电场矢量和传播方向所构成的平面叫做光波的振动面。如果随着时间的流逝，此振动面不发生改变，那么这束光就叫做面偏振光，其振动面就叫做偏振面。平面偏振光能够分解为振幅、频率相同，旋转方向相反的两圆偏振光。其中电矢量以逆时针方向旋转的叫做左旋圆偏振光，电矢量以顺时针方向旋转的叫做右旋圆偏振光。两束振幅、频率相同，旋转方向相反的偏振光也能够合成为一束平面偏振光。若两束偏振光的振幅(强度)不一致，那么合成的就是一束椭圆偏振光。

光学活性物质对左、右旋圆偏振光的吸收率不一致，其光吸收的差值ΔA ( Al - Ad) 叫做该物质的圆二色性(circular dichroism ,简写作CD) 。通过该物质传播的平面偏振光由于圆二色性的存在而变为椭圆偏振光,并且仅仅在发生吸收的波长的地方才可以观察到。

按照Lambert-Beer 定律能够对椭圆率进行证明，圆二色光谱曲线为测量不同波长下的θ(或Δε) 值与波长λ之间的关系曲线。若在此光谱曲线中,若所测定的物质没有特征吸收,就表示其Δε值很小,特征的圆

在蛋白质二级结构的测定方法中，圆二色光谱(简称CD)得到了Z为广泛的应用。在对溶液中蛋白质构象的研究，其比较准确、简单以及快速。其能够在溶液状态下测定，和其生理状态比较接近。并且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，因此，到目前为止，在对蛋白质二级结构的研究中，其占据主导地位，并且已经在蛋白质的构象研究中得到了广泛地应用。圆二色光谱仪为按照圆二色光谱法的原理和测试要求设计制成的仪器。到目前为止目前圆二色光谱法及其仪器已在有机化学、生物化学、配位化学和药物化学等领域得到了广泛地应用，已经成为对有机化合物的立体构型进行研究的一个重要方法。

使用注意事项

1、压片后，请将少量酒精往棉花中浸入用来对压片模具和砂浆进行清洁，将其在红外灯下干燥，然后往干燥机中放回压片模具。往垃圾桶倒入剩余的固体粉末和用过的棉花。

2、j-810 CD光谱仪的氮气消耗量为3 L / min（190-400 nm），3-5 L / min（185 nm），10 L / min（180 nm），30-50 L / min （175nm），60-70L / min（170nm）。所以，在确定蛋白质和其他样品的远紫外光谱时，为了防止臭氧对紫外光谱的吸收干扰，必须对氮气的流速进行增加。

3、对于同一样品，Z好尽可能地对溶液和固体的CD光谱进行比较。

4、若有可能，建议同时对一对对映体的CD光谱进行绘制，用来对其CD信号的真实性进行检查，并且在定量条件下对其对映体纯度进行相互确认。

5、24吨为fw-4压片机的极限压力，压力表的相应读数为37.5 MP。若超过限制，那么很容易使得机器损坏。加压请不要随意。

6、当KBr（或KCl）的剂量大概是50 mg时，光滑均匀的薄膜可以获得。

7、使用压板机时，如果感觉到机油压力手柄上有压力，并且压力表读数为0，请立即松开油阀并检查压力表是否损坏。

8、一段时间未使用机器。使用前，将排水阀拧紧，加压

圆二色光谱仪为对分子结构不对称性进行研究的zui行之有效的 分析仪器。已经在有机化学，生物化学，配位化学和药物化学等领域得到了非常广泛的应用。手性物质和生物大分子为其主要检测对象。

光强度因为多种新技术、新设计为圆二色光谱仪所采用而达到zui大，尤其是远紫外区。光谱的快速、准确采集通过其先进、精密的数字式数据采集系统得以实现，具有较高的灵敏度。更细微的结构信息能够通过圆二色光谱仪检测出来，从而为在检测时得到精确、细微的指纹性结构信息提供了可能性。只需要使用较少的样品量。

有机化学应用：

如下为圆二色光谱仪在有机化学方面的应用：

1、温度效应，分子振动或转动能级数变化等方面的信息能够获得。

2、溶剂效应，对溶剂-溶质间的相互作用及它们的光学活性进行研究。

3、光谱分析也可以使用圆二色光谱仪。

4、测定手性结构，例如密切相关的一类化合物的相对构型通过对应关系和邻近关系来进行测定。测定特定原子在手性分子中的位置以及官能团的位置。对构象进行测定。JD构型通过八区律等一类经验和半经验的规律，以及和其它方法相结合来测定等。

5、对包括溶剂和手性大分子的手性介质诱导的光学活性进行研究。

主要特点：

1、快速动力学停流装置由各路独立步进电机来进行控制。

2、一机多功能：能够对荧光各相异性谱、线二色谱、光散色谱、总荧光谱、圆二色光谱以及紫外吸收光谱进行检测。

手性光学活性物质的研究为圆二色光谱仪的主要用途。蛋白质构象研究、物理化学、聚合物化学、蛋白质折叠研究、生物化学与宏观大分子、金属络合物化学、药物定量分析、天然有机化学、光学活性物质纯度测试以及有机立体化学研究等均可以使用圆二色光谱仪。

圆二色光谱仪能够在温度变化的同时将相变的热力学焓变、相变温度Tm、荧光光谱、圆二色谱以及紫外吸收光谱等多维度的表征参数获得。从而优化和筛选药物体系的组方以及进行生物大分子的结构、稳定性的判断。构象变化信息利用体系的CD变化与温度变化的相关关系获得，相比于微量量热学的表达，有更加清晰的分辨率和更加高的灵敏度。

安装条件：

在对振动圆二色光谱仪安装的过程中，以下几个条件需要我们确认：

1、工作台需要防止震动，因此，用于放置仪器的实验台必须坚实稳定。长度大于165厘米，宽度在90-110厘米之间，高度在70-80厘米为振动圆二色光谱仪所需空间。如果需要在同一平台放置计算，那么需要相应地加长长度。

2、将带压力表和减压阀的一瓶氮气准备好，与此同时将一个20L/min的流量计连接于减压阀后。

3、实验室要防止阳光直接照射以及防尘防湿，温度在15-25摄氏度之间为室温要求，相对湿度应当低于70%，没有磁场对实验室进行干扰，不能有粉尘及干扰气体在实验室中。仪器放置的地方应当防止空调、风扇直接吹向仪器，防止阳光直射。如果要使用空调，那么不要将空调出风口和振动圆二色光谱仪所在位置正对着。

4、电源的准备：AC 220V+/-5%，为了方便仪器使用时接地，预置地线接头。如果，装机时，由于电源不能够达到规定标准，或没有接地线而导致仪器有问题出现，，那么根据规定，不保修，插排zui少需要10个插孔数，除此以外还需要一个16A插板。

圆二色光谱仪为对分子结构不对称性进行研究的Z行之有效的 分析仪器。已经在有机化学，生物化学，配位化学和药物化学等领域得到了非常广泛的应用。手性物质和生物大分子为其主要检测对象。

在蛋白质二级结构的测定方法中，圆二色光谱(简称CD)得到了Z为广泛的应用。在对溶液中蛋白质构象的研究，其比较准确、简单以及快速。其能够在溶液状态下测定，和其生理状态比较接近。并且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，因此，到目前为止，在对蛋白质二级结构的研究中，其占据主导地位，并且已经在蛋白质的构象研究中得到了广泛地应用。

快速动力学停流装置

1、注射针体积：10毫升

2、用微量检测池附件时Z少时间：0.25ms

3、扩充能力:原位微电导检测、温度跳跃变化及自动滴定、超低温停流以及冷冻淬灭等。

4、软件:停流反应及光谱测量能够由单一软件自动控制。

5、混合器: 球型GX率混合池。

6、混合模式:3-4路混合，各路独立步进电机控制。

7、Z小注射体积:10微升。

8、每路流量范围:0.01-1.0mL/s

9、混合比:从1:1-1:100能够连续变化。

参数

1、杂散光:小于2×10-4%(200纳米)

2、噪声: 圆二色检测:0.01mdeg；紫外检测: 5 ×10-U rms ；荧光检测: 水拉曼峰信噪比大于2000:1 

3、基线稳定性:小于0.01mdeg/hr

4、采样频率:每点10微秒到每点1000秒之间。

5、光学系统: 双光栅 (1200条/毫米)

6、光源:150瓦汞氙灯和150瓦氙灯两个光源同时装置。

7、检测功能:荧光各相异性谱、线二色谱、光散色谱、总荧光谱、圆二色光谱和紫外吸收光谱。

8、波长范围:165-900纳米。

9、波长准确度:±0.1纳米。

应用：

1、热变性，化学变性研究

2、化合物构型的研究

3、蛋白质二级结构，生物大分子研究

4、测定光学活性化合物的结构

5、研究蛋白质，多肽，核酸的构象。

6、反应动力学。