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免疫沉淀的改进方法
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本文由 东莞市谱标实验器材科技有限公司 整理汇编
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免疫沉淀的改进方法
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免疫沉淀的改进方法- 免疫沉淀的改进方法[详细]
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2013-11-11 00:00
其它
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- 免疫沉淀技术的应用
- 上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]
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2018-10-08 10:00
产品样册
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- 免疫沉淀的实验过程
- 上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]
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2018-10-08 10:00
产品样册
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- 免疫沉淀实验注意事项
- 1.用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验？答：抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同，和抗原以及ProteinG或ProteinA的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。一般来说，多抗是沉淀反应**的选择。另外，纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫沉淀。2.为什么溶解抗原的缓冲液中要加入一定量的蛋白酶YZ剂？答：从活性细胞裂解出来的样品中，往往含有一定量的蛋白酶。为防止预检测蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每YZ剂，并且在低温下进行实验。3.溶解抗原的缓冲液的配制需要注意什么？答：多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强表面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面，如用弱表面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合。4.免疫沉淀实验应如何把握抗体和缓冲液的比例？答：每次沉淀实验之前，考虑抗体/缓冲液的比例十分重要。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清；缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。具体比例视具体情况而定。5.免疫沉淀应该如何配制细胞裂解液？答：适当的细胞裂解液的选择取决于所要研究蛋白的特性。TritonX-100,NP40是非离子界面活性剂，作用温和;DOC（sodiumde-oxycholate），SDS是离子性的强活性剂。所以裂解液的配制时所用去污剂的种类和浓度以及盐浓度等条件需实验者进行优化。注意如果忘记加TritonX-100，只加DOC或SDS，可能使抗体完全失去活性。[详细]
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- 沪鼎生物免疫沉淀技术服务流程
- 免疫沉淀反应主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。据此现象设计的沉淀实验主要包括絮状沉淀试验，环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为免疫扩散实验和免疫电泳技术2类。免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其基本原理是:细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行SDS-PAGE及Westernblotting分析。免疫沉淀操作流程（以ProteinAAgarose方法为例）：一、蛋白样品的准备1.对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。2.对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。3.对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。二、去除非特异性结合1.取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的ProteinAAgarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。2.2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。三、免疫沉淀1.加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动放置一个晚上。2.再加入20微升充分重悬的ProteinAAgarose，4℃缓慢摇动1-3个小时。3.2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉ProteinAAgarose。4.用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤。5.完成Z后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。6.100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。免疫共沉淀：参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。[详细]
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