免疫沉淀实验注意事项

本文由 上海索宝生物科技有限公司 整理汇编

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• 免疫沉淀实验注意事项

  1.用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验？答：抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同，和抗原以及ProteinG或ProteinA的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。一般来说，多抗是沉淀反应**的选择。另外，纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫沉淀。2.为什么溶解抗原的缓冲液中要加入一定量的蛋白酶YZ剂？答：从活性细胞裂解出来的样品中，往往含有一定量的蛋白酶。为防止预检测蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每YZ剂，并且在低温下进行实验。3.溶解抗原的缓冲液的配制需要注意什么？答：多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强表面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面，如用弱表面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合。4.免疫沉淀实验应如何把握抗体和缓冲液的比例？答：每次沉淀实验之前，考虑抗体/缓冲液的比例十分重要。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清；缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。具体比例视具体情况而定。5.免疫沉淀应该如何配制细胞裂解液？答：适当的细胞裂解液的选择取决于所要研究蛋白的特性。TritonX-100,NP40是非离子界面活性剂，作用温和;DOC（sodiumde-oxycholate），SDS是离子性的强活性剂。所以裂解液的配制时所用去污剂的种类和浓度以及盐浓度等条件需实验者进行优化。注意如果忘记加TritonX-100，只加DOC或SDS，可能使抗体完全失去活性。[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 免疫沉淀的实验过程

  上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]

  2018-10-08 10:00

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• 免疫沉淀的改进方法

  免疫沉淀的改进方法[详细]

  2013-11-11 00:00

  其它

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• 免疫沉淀技术的应用

  上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司，生物引擎在广大用户的帮助和支持下，经过不懈的努力，已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一，主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品，产品畅销国内大部分地区，销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，公司的服务和业务网络遍及全国，在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]

  2018-10-08 10:00

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• V-P实验原理注意事项

  V-P实验原理注意事项（1）原理：有些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基发生反应生成红色的化合物。若培养基中的胍基含量过少，则可加入少量含胍基的化合物等。（2）V-P试剂：肌酸0.3%或原粉，40%的NaOH溶液。（3）实验方法：接种实验菌于葡萄糖蛋白胨水培养基(与甲基红实验相同)中，每次两个重复，置适温培养2-6d，取培养液和40%NaOH等量相混，加入少许肌酸，10min如培养液出现红色，即为实验阳性反应，有时需要放置更长时间才出现红色反应。（4）应用：本实验常与甲基红实验一起用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。[详细]

  2024-10-03 20:15

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• 沪鼎生物免疫沉淀技术服务流程

  免疫沉淀反应主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。据此现象设计的沉淀实验主要包括絮状沉淀试验，环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为免疫扩散实验和免疫电泳技术2类。免疫共沉淀是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其基本原理是:细胞裂解液中加入抗体，与抗原形成特异免疫复合物，经过洗脱，收集免疫复合物，然后进行SDS-PAGE及Westernblotting分析。免疫沉淀操作流程（以ProteinAAgarose方法为例）：一、蛋白样品的准备1.对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。2.对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。3.对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。二、去除非特异性结合1.取200微升至1毫升蛋白样品，蛋白量约为200微克至1毫克，加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20微升充分重悬的ProteinAAgarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。2.2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。三、免疫沉淀1.加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动放置一个晚上。2.再加入20微升充分重悬的ProteinAAgarose，4℃缓慢摇动1-3个小时。3.2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉ProteinAAgarose。4.用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤。5.完成Z后一次洗涤后，去除上清，加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。6.100℃或沸水浴处理3-5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。免疫共沉淀：参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。[详细]

  2024-10-03 09:26

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• 凯氏定氮仪实验过程中的注意事项

  凯氏定氮仪实验过程中的注意事项[详细]

  2014-05-09 00:00

  课件

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• 马弗炉实验小样灰化时注意事项

  马弗炉实验小样灰化时注意事项马弗炉是英文Mufflefurnace翻译过来的。Muffle是包裹的意思，furnace是炉子，熔炉的意思。马弗炉在ZG的通用叫法有以下几种：电炉、电阻炉、茂福炉、马福炉。马弗炉是一种通用的加热设备.依据外观形状可分为箱式炉管式炉坩埚炉。马弗炉属于周期作业式，供实验室、工矿企业、科研单位作元素分析测定和一般小型钢件淬火、退火、回火等热处理时加热用，高温马福炉还可作金属、陶瓷的烧结、溶解、分析等高温加热用。化灰时的注意事项：（1）瓷舟中的试样要摊平，且试样的厚度不得太大;（2）灰化时可打开炉门，将耐热板上的盛有试样的瓷舟慢慢推进箱形高温电炉炉口，先使瓷舟中的试样慢慢灰化冒烟，待几分钟后试样不再冒烟时，慢慢将瓷舟推入高温炉内的炽热部位，关闭炉门使试样在815±15下灼烧。在灰化过程中如有煤样着火爆燃，则这只煤样就作废必须重新称样灰化。（3）温炉应有烟囱或通风孔，以使煤样在灼烧过程中能排除燃烧产物和保持空气的流通。（4）高温炉的控制系统必须指示准确。高温炉的温升能力必须达到测定灰分的要求。（5）灰化时间应能保证试样在815±15的温度下完全灰化，但随意延长灰化时间也是不利的。上海凯朗仪器设备厂专业生产鼓风干燥箱、真空干燥箱、马弗炉、生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热恒温培养箱、试验箱、恒温摇床、水槽、水浴锅等实验室设备。[详细]

  2018-10-01 10:00

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• 蛋白盐析实验步骤及注意事项

  蛋白盐析实验步骤及注意事项[详细]

  2024-09-28 15:14

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• 水平垂直燃烧测试仪实验注意事项

  水平垂直燃烧测试仪实验注意事项[详细]

  2024-09-28 02:29

  选购指南

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• 马弗炉实验小样灰化时的注意事项

  马弗炉实验小样灰化时的注意事项马弗炉是英文Mufflefurnace翻译过来的。Muffle是包裹的意思，furnace是炉子，熔炉的意思。马弗炉在ZG的通用叫法有以下几种：电炉、电阻炉、茂福炉、马福炉。马弗炉是一种通用的加热设备.依据外观形状可分为箱式炉管式炉坩埚炉。马弗炉属于周期作业式，供实验室、工矿企业、科研单位作元素分析测定和一般小型钢件淬火、退火、回火等热处理时加热用，高温马福炉还可作金属、陶瓷的烧结、溶解、分析等高温加热用。化灰时的注意事项：（1）瓷舟中的试样要摊平，且试样的厚度不得太大;（2）灰化时可打开炉门，将耐热板上的盛有试样的瓷舟慢慢推进箱形高温电炉炉口，先使瓷舟中的试样慢慢灰化冒烟，待几分钟后试样不再冒烟时，慢慢将瓷舟推入高温炉内的炽热部位，关闭炉门使试样在815±15下灼烧。在灰化过程中如有煤样着火爆燃，则这只煤样就作废必须重新称样灰化。（3）温炉应有烟囱或通风孔，以使煤样在灼烧过程中能排除燃烧产物和保持空气的流通。（4）高温炉的控制系统必须指示准确。高温炉的温升能力必须达到测定灰分的要求。（5）灰化时间应能保证试样在815±15的温度下完全灰化，但随意延长灰化时间也是不利的。上海凯朗仪器设备厂专业生产鼓风干燥箱、真空干燥箱、高温箱、电子防潮柜、箱式电炉、恒温恒湿箱、人工气候箱、光照培养箱、生化培养箱、霉菌培养箱、二氧化碳培养箱、隔水式培养箱、电热恒温培养箱、高低温试验箱、恒温摇床、水槽、水浴锅等实验室设备。[详细]

  2018-10-01 10:00

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• 大鼠白细胞介素2（IL-2）实验注意事项.pdf

  大鼠白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T100ng/L-1800ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本白细胞介素2（IL-2）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素2（IL-2）水平。用纯化的大鼠白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2），再与HRP标记的白细胞介素2（IL-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素2（IL-2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素2（IL-2）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（3600ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。1800ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液900ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液450ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液225ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液112.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月上海恒远生物科技有限公司，专业生产代理各种elisa试剂盒，质量保证，值得信赖，如果你想了解更多关于试剂盒的详细信息，欢迎来电来函！联系电话：021-60515410,18221290082！[详细]

  2018-11-15 10:03

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• 植物染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒 产品说明书

  植物染色质免疫沉淀分析（CHIP）试剂盒 产品说明书[详细]

  2015-01-08 00:00

  标准

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• 实验离心机使用中的设置和注意事项

  实验离心机使用中的设置和注意事项[详细]

  2009-03-25 00:00

  选购指南

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• 实验室里磁力搅拌器使用步骤和注意事项

  实验室里磁力搅拌器使用步骤和注意事项[详细]

  2014-07-11 00:00

  专利

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• 荧光定量PCR实验中的策略及注意事项

  荧光定量PCR实验中的策略及注意事项[详细]

  2024-09-11 17:46

  应用文章

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• 防护服喷溅喷射液密性实验装置使用注意事项

  防护服喷溅喷射液密性实验装置使用注意事项[详细]

  2013-11-07 00:00

  应用文章

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• 鱼组胺（Histamine）的实验原理及注意事项 ELISA试剂盒

  鱼组胺（Histamine）的实验原理及注意事项 ELISA试剂盒[详细]

  2015-03-24 00:00

  实验操作

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• 小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理和注意事项

  小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理和注意事项小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的小鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8．本试剂不同批号组分不得混用。9.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。[详细]

  2018-09-28 10:00

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• 人转化生长因子β1（TGF-β1）实验的操作注意事项

  人转化生长因子β1（TGF-β1）实验的操作注意事项[详细]

  2024-09-27 23:57

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