V-P实验原理注意事项

本文由 上海谷研实业有限公司 整理汇编

2024-10-03 20:15 1721阅读次数

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• V-P实验原理注意事项

  V-P实验原理注意事项（1）原理：有些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基发生反应生成红色的化合物。若培养基中的胍基含量过少，则可加入少量含胍基的化合物等。（2）V-P试剂：肌酸0.3%或原粉，40%的NaOH溶液。（3）实验方法：接种实验菌于葡萄糖蛋白胨水培养基(与甲基红实验相同)中，每次两个重复，置适温培养2-6d，取培养液和40%NaOH等量相混，加入少许肌酸，10min如培养液出现红色，即为实验阳性反应，有时需要放置更长时间才出现红色反应。（4）应用：本实验常与甲基红实验一起用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性。[详细]

  2024-10-03 20:15

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• 免疫沉淀实验注意事项

  1.用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验？答：抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同，和抗原以及ProteinG或ProteinA的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。一般来说，多抗是沉淀反应**的选择。另外，纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫沉淀。2.为什么溶解抗原的缓冲液中要加入一定量的蛋白酶YZ剂？答：从活性细胞裂解出来的样品中，往往含有一定量的蛋白酶。为防止预检测蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每YZ剂，并且在低温下进行实验。3.溶解抗原的缓冲液的配制需要注意什么？答：多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强表面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面，如用弱表面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合。4.免疫沉淀实验应如何把握抗体和缓冲液的比例？答：每次沉淀实验之前，考虑抗体/缓冲液的比例十分重要。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清；缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。具体比例视具体情况而定。5.免疫沉淀应该如何配制细胞裂解液？答：适当的细胞裂解液的选择取决于所要研究蛋白的特性。TritonX-100,NP40是非离子界面活性剂，作用温和;DOC（sodiumde-oxycholate），SDS是离子性的强活性剂。所以裂解液的配制时所用去污剂的种类和浓度以及盐浓度等条件需实验者进行优化。注意如果忘记加TritonX-100，只加DOC或SDS，可能使抗体完全失去活性。[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 鱼组胺（Histamine）的实验原理及注意事项 ELISA试剂盒

  鱼组胺（Histamine）的实验原理及注意事项 ELISA试剂盒[详细]

  2015-03-24 00:00

  实验操作

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• 小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理和注意事项

  小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理和注意事项小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠二胺氧化酶(DAO)水平。用纯化的小鼠二胺氧化酶(DAO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入小鼠二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的二胺氧化酶(DAO)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠二胺氧化酶(DAO)浓度。小鼠二胺氧化酶Elisa试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8．本试剂不同批号组分不得混用。9.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。[详细]

  2018-09-28 10:00

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• 热导原理注意事项

  热导原理注意事项[详细]

  2013-04-25 00:00

  标准

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• 迈克尔逊干涉仪实验原理

  迈克尔逊干涉仪实验原理[详细]

  2008-07-15 00:00

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• 传热实验化工原理实验报告

  传热实验化工原理实验报告[详细]

  2016-05-12 00:00

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• 化工原理实验简单装置

  化工原理实验简单装置[详细]

  2024-09-28 01:19

  专利

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• 凯氏定氮仪实验过程中的注意事项

  凯氏定氮仪实验过程中的注意事项[详细]

  2014-05-09 00:00

  课件

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• 马弗炉实验小样灰化时注意事项

  马弗炉实验小样灰化时注意事项马弗炉是英文Mufflefurnace翻译过来的。Muffle是包裹的意思，furnace是炉子，熔炉的意思。马弗炉在ZG的通用叫法有以下几种：电炉、电阻炉、茂福炉、马福炉。马弗炉是一种通用的加热设备.依据外观形状可分为箱式炉管式炉坩埚炉。马弗炉属于周期作业式，供实验室、工矿企业、科研单位作元素分析测定和一般小型钢件淬火、退火、回火等热处理时加热用，高温马福炉还可作金属、陶瓷的烧结、溶解、分析等高温加热用。化灰时的注意事项：（1）瓷舟中的试样要摊平，且试样的厚度不得太大;（2）灰化时可打开炉门，将耐热板上的盛有试样的瓷舟慢慢推进箱形高温电炉炉口，先使瓷舟中的试样慢慢灰化冒烟，待几分钟后试样不再冒烟时，慢慢将瓷舟推入高温炉内的炽热部位，关闭炉门使试样在815±15下灼烧。在灰化过程中如有煤样着火爆燃，则这只煤样就作废必须重新称样灰化。（3）温炉应有烟囱或通风孔，以使煤样在灼烧过程中能排除燃烧产物和保持空气的流通。（4）高温炉的控制系统必须指示准确。高温炉的温升能力必须达到测定灰分的要求。（5）灰化时间应能保证试样在815±15的温度下完全灰化，但随意延长灰化时间也是不利的。上海凯朗仪器设备厂专业生产鼓风干燥箱、真空干燥箱、马弗炉、生化培养箱、二氧化碳培养箱、电热恒温培养箱、试验箱、恒温摇床、水槽、水浴锅等实验室设备。[详细]

  2018-10-01 10:00

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• 蛋白盐析实验步骤及注意事项

  蛋白盐析实验步骤及注意事项[详细]

  2024-09-28 15:14

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• 水平垂直燃烧测试仪实验注意事项

  水平垂直燃烧测试仪实验注意事项[详细]

  2024-09-28 02:29

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• 实验理解制冷剂制冷工作原理

  实验理解制冷剂制冷工作原理[详细]

  2013-06-05 00:00

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• 防雨性测试仪实验原理简介

  防雨性测试仪实验原理简介[详细]

  2015-04-27 00:00

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• 人α干扰素（IFN-α）试剂盒实验原理

  人α干扰素（IFN-α）试剂盒实验原理[详细]

  2015-05-22 00:00

  操作手册

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• 伯努利原理实验集锦

  伯努利原理实验集锦[详细]

  2016-05-12 00:00

  实验操作

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• 豚鼠血清一氧化氮试剂盒实验原理

  豚鼠血清一氧化氮试剂盒实验原理[详细]

  2015-06-04 00:00

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• ELISA原理（实验条件、技术要点）

  ELISA原理（实验条件、技术要点）实验条件和技术要点：酶联免疫吸附测定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,简称ELISA）与免疫酶测定等名称所指的内容是不相同的，ELISA的内容专指固相吸附技术和免疫酶标抗体（或抗原）技术相结合的一种方法，它是将抗原或抗体包被在固相支持物（或称载体上），然后再进行免疫反应，形成酶标记的抗原抗体复合物，反应完毕，借助底物显示特异结合的标记抗体（或抗原）上的酶活性，用酶与底物反应后生成的有色产物进行光密度测定，达到抗原或抗体定量的目的。在应用ELISA时，首先要清楚下面内容：1，是检测抗体还是抗原？2，检测的结果是定性还是定量？3，是否需要检测特异抗体的类型？4，所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎样？(1)检测抗原Z常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法，其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难，特别是检测微生物的抗原，因为需要标记抗原，这对于某些抗原是很难做到的，甚至是不可能的。另外在竞争法中，酶标记的抗原与标本直接混合在一起，许多标本中含有酶YZ剂或蛋白A样物质，可影响ELISA的结果。(2)检测抗体检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法，这个方法常用于检测特异性IgG、IgA和IgM.。这个方法的**步是捕获所需要检测的一个种类的抗体，接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单，但不适用于检测其他种类的抗体，因为血清中如果有特异IgG存在将与IgM或IgA等竞争结合抗原。竞争法检测抗体有两种方法：一种是将标记的抗体和标本同时加入反应孔内，但标记的抗体和标本中的抗体必须是结合抗原的不同决定簇；另一种是先加标本，冲洗后再加标记的抗体。竞争法检测抗体比间接法容易判断结果，并且比较敏感和特异。不论选择哪种方法，ELISA都包括6个步骤：1，抗原或抗体吸附于固相；2.加标本和试剂；3，孵育和冲洗；4，加酶标抗原或抗体；5，加适当的底物；6，检测和分析结果。虽然ELISA法在理论上十分简单，但每一步都有要注意的事项。不论是新设计的ELISA还是沿用其他ELISA方法都有以下几方面技术要点：固相载体的选择和试剂的制备，反应条件和操作的标准化。酶标记抗原竞争法利用混合的未标记抗原和酶标记抗原相互竞争抗体上的结合点，从而进行抗原的定量。未标记抗原的量越大，则酶标记抗原和抗体的结合就越受到YZ。但是竞争法在实验时比较复杂，有时在抗原混合液与相应抗体孵育后，在测定游离抗原与抗体相结合抗原的活性以前，要先进行盐析或有机溶剂沉淀或第二抗体沉淀等方法把两种不同存在形态的抗原分开。并且在加入底物后，容易产生血清色的物质。因此，每次测定时都需做空白对照。由于这些缺点，酶标记抗原竞争法使用不多。促销期间有精美礼品赠送还可以享受免费代测服务。您只需要把标本寄给我们，一星期左右就可以出实验数据。欢迎购买我公司的ELISA试剂盒，我们承诺试剂盒有质量问题包退包换。上海研谨生物公司对外承接RT-PCR技术服务、细胞培养技术服务、原位杂交技术服务、免疫沉淀技术服务、WesternBlotting技术服务、动物模型构建服务、SCI论文服务、PCR实验服务，并为广大科研用户提供各种高品质的试剂和服务，如细胞、血清、Elisa试剂盒、质粒提取试剂盒、DNA产物纯化试剂盒、病毒RNA提取试剂盒、PCR等产品，针对以上各项服务，我们均有具有丰富服务经验和深厚专业背景的人员团队为您提供技术服务和支持。[详细]

  2018-09-04 10:00

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• NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理

  使用目的：本试剂盒用于测定微生物样本中NADH氧化酶含量。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中NADH氧化酶水平。用纯化的NADH氧化酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NADH氧化酶，再与HRP标记的NADH氧化酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的NADH氧化酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中NADH氧化酶浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（32pg/mL）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。16pg/mL5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液8pg/mL4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液4pg/mL3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液2pg/mL2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液1pg/mL1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液?2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。NADH氧化酶酶联免疫分析实验原理注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-19 10:00

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• 鲑鱼补体蛋白3elisa试剂盒实验原理

  使用目的：本试剂盒用于测定鲑鱼血清、血浆及相关液体样本中补体蛋白3(C3)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鲑鱼补体蛋白3(C3)水平。用纯化的鲑鱼补体蛋白3(C3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入补体蛋白3(C3)，再与HRP标记的补体蛋白3(C3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的补体蛋白3(C3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鲑鱼补体蛋白3(C3)浓度。[详细]

  2018-10-08 10:01

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