细胞活性测定方法

本文由 上海恒远ELISA试剂盒供应商 整理汇编

2024-09-14 22:35 5695阅读次数

收藏 评价 举报

• 分享

立即下载

参与评论

评论

登录后参与评论

登录或新用户注册

• 微信登录
• 密码登录
• 短信登录

请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号

微信扫码，手机电脑联动

注册登录即表示同意《仪器网服务条款》和《隐私协议》

账  号：

密  码：

图片码： 看不清？
换一张？

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

手机号：

图片码： 看不清？
换一张？

短信码： 获取短信码

手机和邮箱号注册新账号>> 忘记密码？

更多资料

• 细胞活性测定方法

  　　　　　　　　细胞活性测定方法细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等。其中MTT法以其快速简便，不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但MTT法形成的Formazan为水不溶性的，需要加有机溶剂溶解，由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan，故有时重复性略差。为了解决这个问题，研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8（WST-8）等。现就这三种四氮唑盐类方法作一个简单介绍：1.MTT法MTT：化学名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。缺点：由于MTT经还原所产生的甲产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。2.XTT法XTT：化学名：2,3-bis（2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl）-5-[（phenylamino）carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲产物。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲产物的吸光度与活细胞的数量成正比。优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。3.CCK-8法或称WST-8法CCK-8试剂中含有WST8：化学名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐]，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲产物（Formazan）。生成的甲物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。缺点:1、与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。2、CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。三种方法的比较MTT法XTT法CCK-8法（WST-8法）甲物水溶性难溶性水溶性水溶性检测波长490nm450nm450nm性状粉末2瓶溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用毋需预制使用有机溶剂DMSO或其它溶剂方便性++++++检测速度++++++重复性+++++稳定性+++++工作量------对细胞毒性------对人体毒性-----MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项MTT原理MTT全称为3-（4,5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。　　缺点：由于MTT经还原所产生的甲产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT0.5克，溶于100ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器**用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT吸光度**在0-0.7范围内。MTT一般**现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，**小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多，尤其当MTT变为灰绿色时就不能再用了。MTT有致癌性，用的时候小心，有条件**带那种透明的簿膜手套。配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉。配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：NaCl8g＋KCl0.2g＋Na2HPO41.44g＋KH2PO40.24g调pH7.4，定容1L。普通MTT法实验步骤：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。2：培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4）20ul。继续孵育4h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ulDMSO，振荡10min，使结晶物充分溶解。4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。药物MTT法实验步骤贴壁细胞：1：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。2：5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板），加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药。一般5-7个梯度，每孔100ul，设3-5个复孔。建议设5个，否则难以反应真实情况3：5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。4：每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。5：终止培养，小心吸去孔内培养液。6：每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7：同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）。悬浮细胞：1：收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul；②加ActinomycinD（有毒性）10ul用培养液稀释（储存液100mg/ml，需预试寻找**稀释度，1:10-1:20）；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml1640）2：置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。3：每孔加入10ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，Z后比色以空白调零。（4）MTT实验吸光度Z后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。（5）用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲颗粒进行比色测定。（6）一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲洗掉，然后每孔加150ulDMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。[详细]

  2024-09-14 22:35

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• RL测定方法

  RL测定方法[详细]

  2005-03-16 00:00

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 溶解氧测定方法

  溶解氧测定方法[详细]

  2013-12-05 00:00

  期刊论文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• pH测定方法

  pH测定方法[详细]

  2024-09-30 06:01

  应用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 残炭测定方法之一：康氏残炭测定方法

  本方法用手测定石油产品经蒸发和热解后留下的残炭量，以提供石油产品相对生焦倾向的指标。本方法一般用于在常压蒸馏时易部分分解、相对地不易挥发的石油产品。对含有能生灰组分的石油产品（用GB508《石油产品灰分测定法》测定）则会得到残炭值偏高的结果，误差的大小取决于所生成灰分的量。注:①本方法中所用的“残炭”一词，是指石油产品经蒸发和热解后所形成的碳质残余物。它不全部是碳。而是一种会进一步热解变化的焦炭。本方法采用“残炭”这个词，只是顺从习惯的称法。②本法广泛应用于多种石油产品。本方法和ZBE30001《石油产品残炭侧定法一（兰氏法）》这两种方法所测得的残炭值，不但在数俏上不相同，而且它们之间也找不到满意的相互关系。对于一些不容易装人兰氏焦化球的重质残渣燃料油、焦化原料等油料.宜用本方法测定残炭。燃烧器燃料的残炭值，可用来粗略地估计燃料在蒸发式的釜型和套管型燃烧器中形成沉积物的倾向。同样，不含硝酸戊酯（或如果含有硝酸戊酯，则只要事先测定未加此添加剂基础燃料）的柴油，残炭值大体上与燃烧室的沉积物有对应关系。测定粗柴油的残炭值，对指导粗柴油造气的生产是有用的，而原油残渣、汽缸油料和重质润滑油料的残炭值，对指导润滑油生产也是有用的。下述情况应予注意:a.发动机油：发动机油的残炭值，曾一度被认为能表示发动机油在发动机的燃烧室中生成碳质沉积物量的指标，但由于许多石油产品中都存在添加剂，所以现在看来这一点是值得怀疑的。例如，有灰分生成的清净添加剂，会增加石油产品的残炭值，但它通常可以减少石油产品生成沉积物的倾向。b.柴油:含有硝酸戊酯的柴油的残炭值偏高。但是，如果对不含硝酸戊酯的柴油，或对准备要调人硝酸戊脂的基础燃料进行试验，则其残炭值与燃烧室沉积物有近似的关系。c.含有有灰分生成的添加剂的石油产品:残炭值可能与形成沉积物的倾向无关，而日可能比形成沉积物的相应倾向要高些。本方法参照采用国际标准ISO6615-1983《右油产品残炭测定法（康氏法）》。方法概要把已称重的试样置于坩埚内进行分解蒸馏。残余物经强烈加热一定时间即进行裂化和焦化反应。在规定的加热时间结束后，将盛有碳质残余物的坩埚置于干燥器内冷却并称重，计算残炭值（以原试样的质量百分数表示）。相关检测仪器：YT-268康氏残炭测定仪康氏残炭测定仪[详细]

  2018-08-20 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 方法介绍：针叶光合作用测定方法

  方法介绍：针叶光合作用测定方法[详细]

  2014-05-28 00:00

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 石油产品沥青延度测定方法

  石油产品沥青延度测定方法[详细]

  2014-12-02 00:00

  安装说明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 微量水分测定仪测定方法

  微量水分测定仪国标及测试方法[详细]

  2018-08-19 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 石油产品色度测定方法

  1.主题内容与适用范围本标准规定了测定石油产品颜色的方法。本标准适用于各种润滑油、煤油及柴油等石油产品。2.引用标准GB/T6540石油产品颜色测定法3.方法概要将试样注人比色管内，然后与标准玻璃色片相比较，以其相当的色号作为该试样的色度。4.仪器与材料4.1仪器4.1.1比色仪:由光源、标准色盘、梭镜和观察目镜等组成，并附有比色管。比色仪在出厂时应经过调整，使视野的两半部光度一致。4.1.2比色管:内径为32.5-33.4mm.高为120-130mm,由无色透明玻璃制成的平底圆筒4.2材料4.2.1煤油:稀释深色油品用。颜色水白，并不得大于本标准1号色度。4.2.2擦镜纸。5.准备工作5.1用擦镜纸将比色管仔细擦净。5.2向一只比色管内注人蒸馏水至50mm以下的深度，放人带盖容器室的右边作为参比液。5.3向另一只比色管内注人透明的试样至50mm以上的深度，放人带盖容器室的左边，盖上盖子。若试样浑浊不透明时，则需加热至浑浊消失后注人比色管内，立即测定。5.4如试样的颜色深于25号标准玻璃色片时，则用煤油稀释后测定混合物的颜色。稀释的比例是试样与煤油的体积比为15:85.相关产品链接：石油产品色度测定仪YT-0168石油产品色度测定仪[详细]

  2018-08-20 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 蛋白质溶液浓度测定方法

  蛋白质溶液浓度测定方法蛋白质溶液浓度测定方法有多种，下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定，往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。一、双缩脲法双缩脲法是**个用比色法测定蛋白质浓度的方法，至令仍广泛采用。在需要快速，但不很准确的测定中，常用此法。硫铵不干扰显色，这对蛋白质提纯的早期价段是非常有利的。双缩脲法的原理是Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有Zda吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。干扰物有硫醇，以及具有肽性质缓冲液，如Tris、Good缓冲液等。可用沉淀法除去干扰物，即用等体积10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白质，然后弃去上清液，再用已知体积的1mNaOH溶解沉淀的蛋白质进行定量测定。二、Lowry法此法是双缩脲法的进一步发展。他的**步就是双缩脲反应，即Cu++与蛋白质在碱性溶液中形成络合物，然后这个络合物还原磷钼磷-磷钨酸试剂（福林-酚试剂），结果得到深蓝色物。此法比双缩脲法灵敏得多，适合于测定20mg/L～400mg/L含量的蛋白质溶液。其干扰物质与双缩脲法相同，而且受他们的影响更大，硫醇和许多其他物质的存在会使结果严重偏差。另外要注意的是，加入福林试剂时要特别小心，试剂只在酸性pH环境中才稳定，上述提到的还原反应只有在pH10时才发生，因此，福林试剂加入到碱性的Cu2+-蛋白质溶液中时，必须立刻搅拌，以使磷钼酸-磷钨酸试剂在未被破坏之前能有效地被Cu2+-蛋白质络合物所还原。三、紫外吸收法大多数蛋白质在280nm波长处有特征的Zda吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的缘故，因此，利用这个特异性吸收，可以计算蛋白质的含量。如果没有干扰物质的存在，在280nm处的吸收可用于测定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白质溶液。部分纯化的蛋白质常含有核酸，核酸在260nm波长处有Zda吸收。有核酸时，所测得的蛋白质浓度必须作适当校正，一般按下述公式粗略计算：是蛋白质溶液在280nm波长处（光程1厘米）测得的光密度值。是蛋白质溶液在260nm小波长处（光程1厘米）处所测得的光密度值。此方程是从烯醇酶（在酵母核酸存在时）得出来的。因此，对其他蛋白质和其他核酸不一定适用。由于各种蛋白质所含芳香族氨基酸的量不同，因此，浓度为0.1%的各种蛋白质在280nm处的消光系数（）在0.5～2.5之间变化。所有的蛋白质在230nm以下都有强吸收。例如，牛血清白蛋白的α0.1%在225nm和215nm处分别为5.0和11.7，而在280nm处测为0.58。在230nm以下的强吸收是由于肽键的存在，因此，此值对所有的蛋白质都是一样的。从215nm和225nm处的光密度之差可用于测定浓度为10μl/ml～100μl/ml的蛋白质。蛋白质浓度可以近似地由下式得到：光密度之差求得，这一公式是减去溶液中非蛋白质成分产生的误差。但是，蛋白质之间的分子量差异比较大，因此，在比较几种蛋白质含量时，必须作适当的校正。由于蛋白质的吸收峰常因pH改变而变化，所以在制作标准曲线时，必须与样品条件一致。相关产品如下：联系方式上海索莱宝生物科技有限公司电话：021-6485566518018609966传真：021-54261506邮编：200233地址：上海市钦江路15号14层邮箱：solarbio@126.com网址：www.shsolarbio.com优质试剂质量放心价格Zdi为ZG生物产业做贡献蛋白浓度测定相关产品特价促销索宝特价另有其他常用生化试剂欢迎询问【021-54100800】[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 饲料粗脂肪测定方法

  本标准规定了动物饲料脂肪含量的测定方法，本方法适用于油籽和油籽残渣以外的动物饲料，为了本方法的测定效果，将动物饲料分为下列两类；B类产品的样品提取前需要水解。B类：纯动物性饲料，包括乳制品；脂肪不经预先水解不能提取的纯植物性饲料，如谷蛋白、酵母、大豆及马铃薯以及加热处理的饲料。含有一定数量加工产品的配合饲料，其脂肪含量至少有20%来自这些加工产品。A类：B类以外的动物饲料对于油籽，在ISO659[1]中介绍了一种已烷提取的“油含量”测定方法。[详细]

  2018-09-12 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• COD国标测定方法

  重铬酸钾法测定COd方法的适用范围：用0.25mol/L的重铬酸钾溶液可测定大于50mg/L的Cod值，未经稀释的水样的测定上限是700mg/L。用0.025mol/L的重铬酸钾溶液可测定5-50mg/L的Cod值。[详细]

  2018-10-18 10:00

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 阿维菌素液相色谱测定方法

  阿维菌素液相色谱测定方法[详细]

  2018-11-13 15:46

  产品样册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 水质测定方法—国家标准

  [详细]

  2020-04-26 17:54

  标准

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 六价铬测定方法（EPA3060A）

  六价铬测定方法（EPA3060A）[详细]

  2024-09-28 00:12

  报价单

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 一氧化碳残留量测定方法

  一氧化碳残留量测定方法[详细]

  2024-09-22 22:42

  报价单

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 沥青软化点测定方法

  沥青软化点测定方法[详细]

  2024-09-28 21:29

  实验操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 测定COD的方法

  测定COD的方法[详细]

  2024-09-29 14:51

  操作手册

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 钙镁离子的测定方法

  1．方法提要 钙离子测定是在PH12~13时，以钙-羧酸为指示剂，用EDTA与标准滴定溶液测定水样中钙离子含量。滴定EDTA与溶液中游离的钙离子反应形成络合物，溶液颜色变化由紫色变为亮蓝色时即为终点。[详细]

  2025-01-20 10:51

  应用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 温石棉比表面积测定方法测定比表面积

  温石棉比表面积测定方法测定比表面积[详细]

  2008-08-07 00:00

  选购指南

  |

  • 
  • 
  • 
  •