呕吐毒素残留快速检测试纸条的研制

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  2018-11-13 15:46

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  呕吐毒素（vomitoxin）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用1使用目的：本试剂盒用于各种谷物、饲料、麦芽啤酒和麦芽汁中呕吐毒素（vomitoxin）残留的定量检测。2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有呕吐毒素（vomitoxin）偶联抗原，加入呕吐毒素（vomitoxin）标准品或样品，游离呕吐毒素（vomitoxin）与微孔条上预包被的呕吐毒素（vomitoxin）偶联抗原互相竞争抗呕吐毒素（vomitoxin）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中呕吐毒素（vomitoxin）含量成反比，通过标准曲线计算样品中呕吐毒素（vomitoxin）的含量。3试剂盒组成3.1预包被的呕吐毒素（vomitoxin）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。3.2呕吐毒素（vomitoxin）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗呕吐毒素（vomitoxin）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。3.4显色液A：1瓶（6ml）。3.5显色液B：1瓶（6ml）。3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9说明书一份。4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2甲醇。5贮存5.1试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2未用完的微孔板应该密封干燥保存6注意事项6.1使用试剂盒前请仔细阅读说明书。6.2不要使用过期试剂盒。6.3试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4标准品中含有呕吐毒素（vomitoxin），使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。6.7不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9混合试剂时应避免起泡。7工作液准备7.1呕吐毒素（vomitoxin）标准品溶液：0ppb，0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用7.3样本稀释液：用蒸馏水按1:10（1+9）稀释备用7.3显色剂：已备用，避免光线直照7.4反应终止液：已备用8样品处理：（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）一般样品处理8.1取10g粉碎的样品，加20ml70%甲醇溶液8.2QL振荡3分钟8.3用WhatmanNo1滤纸过滤8.4取100l处理后的样品，加入400l样本稀释液8.5取100μl稀释液进行分析动物组织前处理8.6准确称取1±0.05g匀浆后的组织样品到50ml的聚苯乙烯离心管中；加入3ml乙腈--丙酮提取溶液，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮气流下吹干8.8加入3.2mL样品稀释液,750rpm涡旋20s8.9取100ml用于分析饲料前处理方法8.10准确称取1±0.05g粉碎饲料样品到50ml的聚苯乙烯离心管中；加入4ml乙腈，1ml丙酮，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮气流下吹干8.12加入2.8mL样品稀释液,涡旋20s，混匀后取100ml用于分析牛奶前处理方法8.13取1ml牛奶样品到5ml聚苯乙烯离心管中；加入4ml样品稀释液，混匀后取100ml用于分析奶粉前处理方法8.14准确称取0.3g奶粉样品到7ml的聚苯乙烯离心管中；加入2mlPBS溶液，2ml正己烷，震荡混匀8.154000r/min以上离心5min，去除有机层和中间层，取下层溶液100ml到400ml样品稀释液8.16混匀后取100ml用于分析9酶免分析步骤9.1实验须知9.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的极ng确度和准确度。9.1.2使用后请立即将试剂放回2~8℃保存9.1.3请不要改变分析程序9.1.4请使用极ng确的微量移液器9.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序9.1.6ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作9.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样9.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面9.2分析步骤9.2.1预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测9.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3样品稀释液、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液（蒸馏水或去离子水稀释）9.2.4在B0孔中加入50l0.0ppb标准品溶液9.2.5在各标准孔中加入50μl的标准品溶液9.2.6在各样品孔中加入50l样品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗呕吐毒素（vomitoxin）抗体酶结合物9.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。9.337℃温浴30min（温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）9.3.1甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，Z后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。9.4反应9.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50l显色液A，再加50l显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀9.4.237℃温浴10min9.4.3每孔中加入50l终止液，混匀9.4.4在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。10结果计算10.1定量分析10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以**个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以1**%，即百分吸光度值。B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B00ppb标准溶液的平均吸光度值10.1.2以呕吐毒素（vomitoxin）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为呕吐毒素（vomitoxin）浓度的对数值，求得反对数即为测定液中呕吐毒素（vomitoxin）浓度C（ppb）10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。10.2半定量测定10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。11特异性物质交叉反应呕吐毒素（vomitoxin）1**%12试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.1ppbB0吸光度**值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。13标准曲线模式（仅供参考）试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。[详细]

  2024-09-28 06:59

  产品样册

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• 呕吐毒素（vomitoxin）快速检测ELISA试剂盒操作流程图

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  2015-04-23 00:00

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  2024-09-29 00:08

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• 酶标仪检测饲料中呕吐毒素的方案！

  酶标仪检测饲料中呕吐毒素是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。用水震荡萃取粉碎样品中的DON,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。加入呕吐毒素的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未结合的呕吐毒素和酶标记物。加入无色的底物溶液，培养5分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的呕吐毒素浓度。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 呕吐毒素的高效液相色谱HPLC检测方案

  呕吐毒素的GX液相色谱HPLC检测方案[详细]

  2024-10-09 03:18

  实验操作

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• 呕吐毒素免疫亲和柱

  呕吐毒素免疫亲和柱[详细]

  2012-08-23 00:00

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• 玉米、酱油中呕吐毒素的免疫亲和柱方法（Copure® 呕吐毒素免疫 亲和柱）

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  2024-09-14 05:36

  应用文章

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• 呕吐毒素免疫亲和柱说明书

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  2024-10-06 01:43

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  2009-05-19 00:00

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  2024-09-29 10:40

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• 高效液相色谱法检测黄曲霉毒素残留

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  2013-03-07 00:00

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