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ELISA试剂盒质量平衡及试验规范

本文由 上海盈公生物技术有限公司 整理汇编

2018-09-27 10:00 349阅读次数

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在ELISA试剂盒中通常有3次加样步聚,即加标本,加酶联络物,加底物。加样时应将所加物加在ELISA试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不可溅起,不可发生气泡。加标本通常用微量加样器,按规矩的量参与板孔中。每次加标本应更换吸嘴,避免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规矩的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参与稀释液,再在其间参与血清标本,然后在微型轰动器上轰动1分钟以确保混和。加酶联络物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程灵敏结束。在ELISA试剂盒中通常有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶联络物后。抗原抗体反应的结束需要有一定的温度和时间,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA查看试剂盒中似不恰当。ELISA试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的联络只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,参与板孔中的标本,其间的抗原并不是都有对等的和固相抗联络的机遇,只需Z靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐,因此需经分散才能到达反应的结束。在这以后参与的酶符号抗体与固相抗原的联络也相同如此。这便是为何ELISA查看试剂盒反应老是需要一定时间的温育。温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是试验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体联络的适合温度。在树立ELISA方法作反应动力学研究时,试验标明,两次抗原抗体反应通常在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中,以形成Z多的堆积。但因所需时间太长,在ELISA试剂盒中通常不予选用。ELISA试剂盒的质量凹凸要素取决于这两个方面1.选材目标。2.选材进程。胎牛血清用于选材的胎牛应健康无病并且在指定的出生天数以内,选材进程应严峻按照操作规程实行,制备出的血清要经过严峻的质量判定。分外恳求有:a.要经过滤膜过滤CJ,确保无菌;b.证明所用血清中不含对所出产疫苗病毒的按捺物;c.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家恳求无细菌噬菌体污染;d.对细胞有出色的支持繁衍作用;e.有必要来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具有恰当的监测系统。

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