蛋白酶活性的测定方法

本文由 东莞市谱标实验器材科技有限公司 整理汇编

2024-09-23 23:59 246阅读次数

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• 蛋白酶活性的测定方法

  蛋白酶活性的测定方法[详细]

  2024-09-23 23:59

  其它

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• 衣原体蛋白酶样活性因子使用说明书

  人衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）水平。用纯化的人衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF），再与HRP标记的衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人衣原体蛋白酶样活性因子（CPAF）含量。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：450pmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300pmol/L，200pmol/L，100pmol/L，50pmol/L，25pmol/L）。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：10pmol/L-400pmol/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-10-23 10:31

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• 细胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量检测

  主要用途细胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA，受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解，释放黄色对硝基苯胺，产生吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解萃取样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体、昆虫等）半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景半胱氨酸蛋白酶（Cysteine-requiringAspartateprotease；CASPASE），或称半胱天冬蛋白酶，是调节细胞凋亡的一类蛋白酶家属。半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3；EC3.4.22.56）是半胱氨酸蛋白酶家属中CED-3（CellDeathGeneNumber3；秀丽隐杆线虫细胞死亡基因数3）分支的一种，又称CPP32（CysteineProteinaseProtein32kd；半胱氨酸蛋白酶蛋白32）、apopain（凋亡素）、Yama（印度传说中的死亡之神）等。半胱氨酸蛋白酶-3前体为32kd，被切离为17kd和11kd而激活细胞凋亡。其底物是多聚ADP-核糖多聚酶（poly（ADP-ribose）polymerase；PARP）、半胱氨酸蛋白酶激活DNA酶YZ剂（ICAD）等。半胱氨酸蛋白酶-3的活性检测用来评价细胞或组织的凋亡状况。基于人工合成的四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA（acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-p-Nithoaniline；乙酰天冬氨酰谷氨酰颉氨酰天冬氨酰对硝基苯胺）受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解，释放有色对硝基苯胺，在分光光度仪（405nm波长）下，测定吸光峰值的变化，来定量测定半胱氨酸蛋白酶-3的活性。半胱氨酸蛋白酶-3反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 抗酸剂的活性测定

  抗酸剂的活性测定[详细]

  2004-02-17 00:00

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• 细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒说明书

  细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细菌蛋白酶（PROTEASE）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过底物偶氮酪蛋白受到蛋白酶水解，产生橘红色产物的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。其适用于各种细菌细胞裂解液以及培养上清样品蛋白酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景蛋白酶（protease）又称为肽酶（peptidase）或蛋白质酶（proteinase），是一类蛋白水解的酶，属于水解酶（hydrolase）家属中一员，存在于所有生物体内。通过肽键的水解，进行蛋白质的分解代谢，参与体内血液凝结、补体系统、凋亡、细胞生长和分化等一系列生理活动。蛋白酶基本分成6类，包括丝氨酸（serine）、苏氨酸（threonine）、半胱氨酸（cysteine）、谷氨酸（glutamate）、天冬氨酸（aspartate）、金属（metalloprotease）蛋白酶等；也可以分成酸性、中性和碱性蛋白酶等；还可以分成内切肽酶，例如胰蛋白酶（trypsin），和外切肽酶，例如羧基肽酶A（carboxypeptidase）。细菌蛋白酶与碳和氮循环有关；作为外毒素（exotoxin），也是细菌致病的毒力（virulence）因子；同时细菌蛋白酶可以应用于食品、制药、皮革、诊断、水处理、银回收和洁净剂工业等。同时据此用以识别革蓝氏阴性细菌，例如枯草芽孢杆菌（Bac.Subtilis）等。基于底物偶氮酪蛋白（azocasein或sulfanilamideazocasein），在细菌蛋白酶的催化水解下，产生橘红色产物，通过其吸收峰值的变化（440nm波长），来定量分析蛋白酶的总活性。其反应系统为：产品内容裂解液（ReagentA）毫升反应液（ReagentB）毫升终止液（ReagentC）毫升中和液（ReagentD）毫升阴性液（ReagentE）微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品制备恒温水槽：用于孵育反应比色皿：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析实验步骤样品准备准备好500微升待测细菌（OD600＝0.4至0.8，即1至2X107细胞/毫升）转移到到1.5毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g（或3500RPM，例如EPPENDORF5415）小心抽去上清液加入xx微升裂解液（ReagentA），充分混匀QL涡旋震荡15秒置于冰槽里15分钟放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作测定准备准备好待测样品（例如细菌裂解萃取液或培养上清等），置于冰槽里设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm，并置零实验开始前，将反应液（ReagentB）置于65℃恒温水槽孵育20分钟后使用三、背景测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入xx微升阴性液（ReagentE）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照样品活性测定移取xx微升反应液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管加入100微升待测样品（蛋白总量100微克）（注意：样品需澄清）上下倾倒数次，混匀在37℃温度下孵育30分钟加入xx微升终止液（ReagentC）涡旋震荡5秒在冰槽里孵育15分钟即刻放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升离心管（注意：沉淀物为橘红色）加入xx微升中和液（ReagentD），混匀转移到比色皿里即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数计算样品活性注意事项本产品为20次操作操作时，须戴手套终止液（ReagentC）和中和液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全系统检测时，背景测定只需一次样品须澄清，至关重要比色测定后，比色皿须清洗彻底建议待测样本的蛋白浓度为100微克/100微升（本公司提供Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1）如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度蛋白酶活性单位浓度定义：在37℃下，pH7.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）产生0.01吸光值的升高变化本公司提供系列细菌生理生化检测试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感[详细]

  2018-11-19 10:00

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• 人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒

  人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)检测试剂盒[详细]

  2024-09-23 19:48

  安装说明

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• 苯胺-4-羟化酶活性的测定

  苯胺-4-羟化酶活性的测定[详细]

  2015-06-09 00:00

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• 胶质酯酶活性的测定

  胶质酯酶活性的测定[详细]

  2024-09-20 22:44

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• 组织钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

  组织钙蛋白酶（CALPAIN）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书（中文版）[详细]

  2015-01-26 00:00

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• 使用自动生石灰活性测定仪的方法

  自动生石灰活性测定仪型号：TD-572■产品介绍自动生石灰活性测定仪的工作原理是生石灰与水发生消化反应时，放出大量的热量，导致石灰水溶液的温度快速升高，通过极ng确计量溶液的温度变化及温度变化所需的时间来表征生石灰活性的大小，自动生石灰活性测定仪完全符合现行标准DL/T323-2010《干法烟气脱硫用生石灰的活性测定方法》，并在原有手动操作的基础上实现了检测工作的完全智能化，避免了人为误差和错误，大大提升了生石灰活性度的检测准确性和极ng确性，为生石灰质量的控制提供了强有力的保障。■产品特点1、实现了生石灰活性度检验的完全数字化、智能化、高精度、GX率；2、采用7寸触摸屏，自动生成检测曲线。3、实现了石灰活性度检测数据的自动采集、分析、计算、存储；4、检测结果随时导出功能，便于数据备份；5、有效避免了人为操作引起的误差或错误。■适用标准DL/T323-2010《干法烟气脱硫用生石灰的活性测定方法》■技术参数搅拌器转速：300±20r/min温度采样周期：1S-20S温度测量范围：0℃-150℃温度测量分度值：0.1℃（PT100），0.5℃（热电偶）工作电源：AC220V50HZ0.5KW外形尺寸：450X250X310mm重量：约15kg[详细]

  2018-10-05 10:00

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• 不同的胞外蛋白酶活性造成肿瘤特异的血清多肽组表达模式

  不同的胞外蛋白酶活性造成肿瘤特异的血清多肽组表达模式[详细]

  2009-09-04 00:00

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• 洋葱色素的提取及抗氧化活性的测定

  洋葱色素的提取及抗氧化活性的测定[详细]

  2024-09-20 00:07

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• 活性炭纤维的孔径分布及比表面积测定

  活性炭纤维的孔径分布及比表面积测定[详细]

  2009-11-16 00:00

  课件

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• 大豆制品中胰蛋白酶YZ剂活性的测定

  大豆制品中胰蛋白酶YZ剂活性的测定GB5009.2242016[详细]

  2018-08-23 10:00

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• 酸性蛋白酶

  酸性蛋白酶[详细]

  2014-09-29 00:00

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• 菠萝蛋白酶

  菠萝蛋白酶[详细]

  2014-09-29 00:00

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• 使用LCMS-8040 测定尿液中腺苷脱氨酶的活性

  使用LCMS-8040 测定尿液中腺苷脱氨酶的活性[详细]

  2014-06-12 00:00

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• 硫氧还蛋白氧化还原酶活性测定试剂盒说明书

  硫氧还蛋白氧化还原酶（thioredoxinreductase,TrxR）活性测定试剂盒说明书一、测定意义TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR具有多种生物学活性，调节机体氧化还原反应和细胞生长与增殖，与人类某些疾病发病机制有关，可能是干预ZL的靶点。二、测定原理TrxR催化NADPH将DTNB还原为TNB，通过测定412nm波长处TNB的增加量，即可计算TrxR活性。三、实验中所需仪器及设备可见分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水四、试剂组成和配置试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存6个月试剂二×1支，充分溶解于6ml双蒸水，4℃避光保存3个月试剂三×2支，临用前，每支充分溶解于3ml双蒸水，4℃保存3个月五、样品前处理称约0.1g组织，加入1ml试剂一（生理盐水），冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清（如上清不清澈，再离心3min）六、TrxR测定操作按下表操作测定管空白管试剂一0.7ml0.8ml试剂二0.1ml0.1ml样0.1ml／试剂三0.1ml0.1ml加试剂三后，迅速混匀，于412nm处测定5min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第300s吸光值记为A2七、TrxR活力计算1、TrxR活力单位定义：在NADPH存在下，每毫克蛋白每分钟催化1μmolDTNB还原的酶量为1U。2、计算公式：TrxR（U/mg）=（△A测定管-△A空白管）/2×（V总/V样）÷Cpr=（△A测定管-△A空白管）×5÷Cpr△A=A2-A1V总：反应总体积（ml）V样：所用样品体积（ml）Cpr：蛋白浓度（mg/ml）注意事项1、样品处理等过程须在冰上进行，且须在样品处理当天测定该酶活，匀浆液避免反复冻融2、测定时，试剂二和试剂三均需放在冰上3、试剂三须现配现用4、测定前须先取1～2个样做预实验，使得吸光值在5min内程线性变化，哺乳动物组织及血液制品TrxR活力测定时，一般须用试剂一（生理盐水）稀释5倍左右5、测定过程操作须迅速优质试剂质量放心价格Zdi为ZG生物产业做贡献订购热线021-54100800[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 测定COD的方法

  测定COD的方法[详细]

  2024-09-29 14:51

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• 钙镁离子的测定方法

  1．方法提要 钙离子测定是在PH12~13时，以钙-羧酸为指示剂，用EDTA与标准滴定溶液测定水样中钙离子含量。滴定EDTA与溶液中游离的钙离子反应形成络合物，溶液颜色变化由紫色变为亮蓝色时即为终点。[详细]

  2025-01-20 10:51

  应用文章

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