利多卡因对术中红细胞内过氧化脂质变化的影响

本文由 上海高创化学科技有限公司 整理汇编

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  利多卡因对术中红细胞内过氧化脂质变化的影响[详细]

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  人（Human）过氧化脂质（LPO）ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆试验原理：LPO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知LPO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将LPO和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中LPO的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80umol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗LPO抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液5、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：80umol/L（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。40umol/L（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液20umol/L（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液10umol/L（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液5.0umol/L（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液2.5umol/L（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0umol/L（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度（umol/L）A8080样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的LPO标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的LPO含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-80umol/L4、敏感度：0.1umol/L[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 血浆胶体渗透压变化对机体的影响

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  2018-09-10 11:11

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  诺迪康胶囊对衰老小鼠脑过氧化脂质及线粒体超微结构的影[详细]

  2013-10-15 00:00

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• 浅谈温度变化对材料阻隔性的影响

  浅谈温度变化对材料阻隔性的影响[详细]

  2024-09-27 23:53

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  2018-08-26 10:00

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• 从沙门氏菌的细胞膜中提纯脂质

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  2007-05-14 00:00

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• 增强型脂质去除产品对三文鱼的 PAH 分析

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  2016-07-14 00:00

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• 不同加热方式结合迷迭香对大口黑鲈脂质氧化及其风味的影响

  摘要：目的 研究腌制及热处理对鲈鱼脂质氧化的影响。方法 以去内脏的新鲜鲈鱼为原料,用0.3%迷迭香提取物、4%盐分别腌制鲈鱼,再分别经水煮、真空低温慢煮(sousvide,SV)、空气炸3种加热方式后制成样品,研究其过氧化值、茴香胺值、硫代ba比妥酸反应产物值(thiobarbituric acid reaction product value, TBARS)、色度、感官评价、电子鼻等指标的变化情况,并利用气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)、电子鼻等技术,对其风味进行了分析。结果 0.3%迷迭香提取物湿腌对于鲈鱼有明显的抗氧化效果。迷迭香提取物湿腌SV处理后鲈鱼过氧化值、TBARS、茴香胺值分别为0.21 mmol/kg、2.24μg/g、0.24,其值都低于水煮和空气炸。GC-MS和电子鼻技术检测得出3种加热方式对鲈鱼气味和挥发性风味物质的影响存在差异。空气炸制的鲈鱼挥发性风味物质含量较高,包含3-甲基丁醛、庚醛和己醛等脂肪氧化产物;经过迷迭香酸湿腌加SV处理过的鱼肉挥发性成分中醛类、醇类含量较低。结论 整体而言[详细]

  2024-09-16 03:34

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• 细胞脂质过氧化氢

  细胞脂质过氧化氢（HYDROGENPEROXIDE）含量比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞脂质过氧化氢（HYDROGENPEROXIDE）含量比色法定量检测试剂盒是一种旨在通过过氧化氢与二价铁离子的氧化反应，进而与显色染料二甲酚橙结合，产生紫色复合产物所呈现的吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解样品中脂质过氧化氢含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良芬顿（Fenton）反应、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解悬液样品（动物、人体等）脂质过氧化氢的浓度检测，以及YZ剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）是一种普遍存在的反应性毒性代谢副产物，通过线粒体呼吸链系统或氧化酶系统产生，受到过氧化酶（peroxidase）和过氧化氢酶（catalase）还原为水而去除。由于过氧化氢成为许多氧化应激状态相关的关键调节因子，诸如NF-ΚB信号通路、氢过氧化介导通路等，因此过氧化氢的产生与哮喘、动脉硬化、糖尿病血管病、骨质疏松症、神经性退行性病变和唐氏综合症等疾病关联。活化炎症细胞浆产生大量过氧化氢，而过氧化氢与铁离子反应，导致脂质过氧化。过氧化氢的含量检测，可以反映机体内的过氧化情况，同时反映机体内细胞活性、蛋白质糖基化、脂质氧化等，以及自由基损伤。脂质过氧化物，例如MDA，与过氧化氢水平之比，称之为过氧化指数（peroxidationindex），作为评价过氧化氢诱导脂质过氧化的标记。基于底物过氧化氢，在酸性条件下，与二价铁（ferric）离子反应（Fenton反应），氧化产生三价铁离子（ferrous）和羟自由基，进而三价铁离子与染料二甲酚橙（3,3'-Bis(N,N-di-(carboxymethyl)amino-methyl)-o-cresolsulfone-phthalein；xylenolorange）结合，形成稳定的紫色复合物，通过其吸收峰值的变化（560nm波长），来定量分析脂质过氧化氢的含量。其反应系统为：产品内容清理液（ReagentA）毫升裂解液（ReagentB）毫升去干扰液（ReagentC）微升反应液（ReagentD）微升显色液（ReagentE）毫升阴性液（ReagentF）毫升产品说明书1份保存方式保存去干扰液（ReagentC）在-20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）具有腐蚀性，注意操作安全；显色液（ReagentE）避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭盖子。有效保证6月[详细]

  2018-11-08 10:00

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• 细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂盒

  主要用途细胞内质网内钙离子浓度荧光检测试剂是一种旨在通过内质网钙离子特异性荧光探针Mag-Fluo-AM，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定内质网中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体细胞（动物、人体等）内内质网钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。其中99％的钙以氟磷灰石钙（calciumfluorophosphateapatite）形式存在于骨组织中。非骨组织钙成分主要存在于细胞内。钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexedcalcium）和离子钙（ionizedcalcium）。钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscularexcitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。其中内质网钙离子储存在控制细胞活化、调控信号通路、蛋白分子转录后修饰，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。内质网钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flamephotometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要内质网纯化。Mag-Fluo-AM染料是一种钙离子低亲和性的荧光标记染料，特异性地由内质网捕获，可以检测内质网内的游离钙离子浓度的变化。在荧光分光光度仪下，激发波长490nm，散发波长525nm，来定量测定内质网的钙浓度。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 小麦粉中过氧化苯甲酰的测定

  小麦粉中过氧化苯甲酰的测定[详细]

  2024-09-20 13:27

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