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诺迪康胶囊对衰老小鼠脑过氧化脂质及线粒体超微结构的影
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本文由 上海高创化学科技有限公司 整理汇编
2013-10-15 00:00 296阅读次数
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诺迪康胶囊对衰老小鼠脑过氧化脂质及线粒体超微结构的影
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- 人(Human)过氧化脂质(LPO)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆试验原理:LPO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知LPO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将LPO和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中LPO的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品:80umol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的抗LPO抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自备材料1.蒸馏水。2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振荡器及磁力搅拌器等。安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:80umol/L(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul。40umol/L(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液20umol/L(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液10umol/L(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液5.0umol/L(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液2.5umol/L(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0umol/L(空白对照)原始浓度不用稀释直接加入50ul。2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。操作步骤1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。9.在450nm波长处测定各孔的OD值。建议使用的实验方案标准品浓度(umol/L)A8080样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品B4040样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品C2020样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品D1010样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品E5.05.0样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品F2.52.5样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品G00样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品H样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品样品局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性:不与其它细胞因子反应。3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的LPO标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的LPO含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-80umol/L4、敏感度:0.1umol/L[详细]
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2018-09-27 10:00
产品样册
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小鼠脂褐质实验原理
- 小鼠脂褐质(Lipofuscin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T0.2ng/ml-10ng/ml使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中脂褐质(Lipofuscin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠脂褐质(Lipofuscin)水平。用纯化的小鼠脂褐质(Lipofuscin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入脂褐质(Lipofuscin),再与HRP标记的脂褐质(Lipofuscin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂褐质(Lipofuscin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠脂褐质(Lipofuscin)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(16ng/ml)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。8ng/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液4ng/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液2ng/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液1ng/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液0.5ng/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月[详细]
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2018-11-16 10:02
产品样册
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迪康90
- 迪康90[详细]
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2011-04-07 00:00
安装说明
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(水凝胶弹簧圈栓塞)缠绕密度对脑动脉瘤流体力学特性的影
- (水凝胶弹簧圈栓塞)缠绕密度对脑动脉瘤流体力学特性的影[详细]
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2024-09-28 09:24
标准
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增强型脂质去除产品对三文鱼的 PAH 分析
- 增强型脂质去除产品对三文鱼的 PAH 分析[详细]
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2016-07-14 00:00
应用文章
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小鼠脑微血管内皮细胞
- 小鼠脑微血管内皮细胞[详细]
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2015-09-18 00:00
报价单
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迪康Decon 90碱性清洗液简介及使用方法
- 迪康Decon90碱性清洗液为一种高级表面活性清洁剂/放射性污染净化剂,可用于实验室、YL及专门工业的各种用途。以非黏性浓缩液体形式提供,用水进行稀释,可生物递降分解、完全可漂洗且不易燃烧。相关产品信息,您可登入www.chinarainbow.com.hk查看。迪康Decon90清洗液是一种由优质阴离子与非离子表面活化剂、稳定剂、碱、非磷酸盐洗涤促净剂和分隔剂合成的水基乳剂一而产生一种碱性浓缩液(PH值为13+)。迪康Decon90清洗液是公认的高级实验室清洁剂,迪康Decon90清洗液在实验室清洁应用中成功地代替了铬酸混合清洁剂。不仅大大改进了清洁效果,而且避免了储存、处理、使用和处理腐蚀酸的各种危险,迪康Decon90清洗液为现代实验室始终保持可靠M清洁度提供了理想的解决方法。迪康Decon90清洗液不包含:酶、乙二胺醋酸/次氮基川三醋酸(EDTA「NTA)和含氯漂白剂。迪康Decon90清洗液的使用方法:1、用水*将迪康90稀释调配成浓度为2%至5%溶液。2、将待清洗物浸泡2至24个小时,浸泡时间依污渍的顽固性及程度而定。3、清洗严重污染物需增加溶液浓度。4、加热溶液(40至50摄氏度)或使用超声波清洗池,可以大大缩短清洗时间。5、清洗物从溶液中取出后,应立即彻底漂洗。清洗物切勿搁置太久再漂洗。建议用水*漂洗三次,以确保完全清除污染物和清洗剂的残留痕迹。6、漂洗之后,请使用不起毛的布仔细擦干或用热气流吹干。[详细]
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2018-10-12 10:00
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使用LCMS-2020对米糠中的脂质进行快速分析
- DART(DirectAnalysisinRealTime)是一种对样品直接离子化的方法。本次将向您介绍使用岛津LCMS-2020,基于DART法对预处理非常繁琐的米糠中脂质进行分析的示例。[详细]
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2018-08-26 10:00
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心脑康胶囊HPLC液相谱图(2010药典芍药苷测定)
- 样品名称:心脑康胶囊色谱条件:色谱柱:月旭UltimateLP-C18(4.6×250mm,5μm)流动相:乙腈-0.05%磷酸溶液(14:86)检测器:UV230nm柱温:35℃流速:1.0ml/min进样量:10μl注意事项:无[详细]
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2018-08-28 10:00
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细胞脂质过氧化氢
- 细胞脂质过氧化氢(HYDROGENPEROXIDE)含量比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞脂质过氧化氢(HYDROGENPEROXIDE)含量比色法定量检测试剂盒是一种旨在通过过氧化氢与二价铁离子的氧化反应,进而与显色染料二甲酚橙结合,产生紫色复合产物所呈现的吸光峰值的变化,即采用比色法来测定细胞裂解样品中脂质过氧化氢含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良芬顿(Fenton)反应、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解悬液样品(动物、人体等)脂质过氧化氢的浓度检测,以及YZ剂筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。技术背景过氧化氢(hydrogenperoxide;H2O2)是一种普遍存在的反应性毒性代谢副产物,通过线粒体呼吸链系统或氧化酶系统产生,受到过氧化酶(peroxidase)和过氧化氢酶(catalase)还原为水而去除。由于过氧化氢成为许多氧化应激状态相关的关键调节因子,诸如NF-ΚB信号通路、氢过氧化介导通路等,因此过氧化氢的产生与哮喘、动脉硬化、糖尿病血管病、骨质疏松症、神经性退行性病变和唐氏综合症等疾病关联。活化炎症细胞浆产生大量过氧化氢,而过氧化氢与铁离子反应,导致脂质过氧化。过氧化氢的含量检测,可以反映机体内的过氧化情况,同时反映机体内细胞活性、蛋白质糖基化、脂质氧化等,以及自由基损伤。脂质过氧化物,例如MDA,与过氧化氢水平之比,称之为过氧化指数(peroxidationindex),作为评价过氧化氢诱导脂质过氧化的标记。基于底物过氧化氢,在酸性条件下,与二价铁(ferric)离子反应(Fenton反应),氧化产生三价铁离子(ferrous)和羟自由基,进而三价铁离子与染料二甲酚橙(3,3'-Bis(N,N-di-(carboxymethyl)amino-methyl)-o-cresolsulfone-phthalein;xylenolorange)结合,形成稳定的紫色复合物,通过其吸收峰值的变化(560nm波长),来定量分析脂质过氧化氢的含量。其反应系统为:产品内容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升去干扰液(ReagentC)微升反应液(ReagentD)微升显色液(ReagentE)毫升阴性液(ReagentF)毫升产品说明书1份保存方式保存去干扰液(ReagentC)在-20℃冰箱里,其余的保存在在4℃冰箱里;反应液(ReagentD)具有腐蚀性,注意操作安全;显色液(ReagentE)避免光照;试剂具有挥发性,注意密闭盖子。有效保证6月[详细]
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2018-11-08 10:00
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bEnd.3 小鼠脑微血管内皮细胞
- 小鼠脑微血管内皮细胞T25瓶细胞处理方法收到细胞后,检查外包装是否完整,细胞培养瓶是否完好。如有破损漏液等问题,请即时联系我们。并进行以下操作:1.75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。2.肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(40×,100×,200×各一张)。3.将细胞放入37度培养箱中预温1-2小时后再做处理,以稳定细胞状态。4.预热培养基(含10%胎牛血清,1%双抗)。5.若细胞密度较小,无菌操作,去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上,进行传代。6.若细胞密度较大,达到80%以上,将细胞传到10cm培养皿培养。7.传代时,T25瓶里保留部分细胞,同步培养,直到能确保10cm培养皿中的细胞状态良好[详细]
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2018-11-19 10:00
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2016-08-29 00:00
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2014-06-09 00:00
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2024-09-20 02:17
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