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即用型大鼠VEGF SP免疫组化染色试剂盒
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www.biokanu.com即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒产品编号:QD82178试剂的保存:短期于4℃保存,长期于-20℃保存。工作原理血管内皮生长因子(VEGF)是相对分子质量为(34~45)×103的同源二聚体糖蛋白。人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究,SP(StreptAvidin-BiotinComplex)大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容1.山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。2.二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗兔IgG。3.SP:1ml(效价1:10,临用前用SP稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。2.0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。3.DAB显色试剂盒。4.免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。2.切片常规脱蜡至水。3.30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。4.酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。5.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。6.适当稀释的一抗,37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)7.加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。8.滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。9.DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:1.如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。3.脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。4.如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。5.在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。
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即用型大鼠VEGF SP免疫组化染色试剂盒
- www.biokanu.com即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒产品编号:QD82178试剂的保存:短期于4℃保存,长期于-20℃保存。工作原理血管内皮生长因子(VEGF)是相对分子质量为(34~45)×103的同源二聚体糖蛋白。人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究,SP(StreptAvidin-BiotinComplex)大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容1.山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。2.二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗兔IgG。3.SP:1ml(效价1:10,临用前用SP稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。2.0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。3.DAB显色试剂盒。4.免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。2.切片常规脱蜡至水。3.30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。4.酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。5.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。6.适当稀释的一抗,37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)7.加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。8.滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。9.DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:1.如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。3.脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。4.如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。5.在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]
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2018-09-22 10:00
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即用型大鼠SP-A免疫组化染色试剂盒
- www.biokanu.com即用型SP-A免疫组化染色试剂盒大鼠IgG使用说明书产品编号:QD82105试剂的保存:短期于4℃保存,长期于-20℃保存。工作原理肺表面活性物质相关蛋白A(pulmonarysurfactant-associatedproteinA,SP-A)是肺表面活性物质(pulmonarysur-factant,PS)中含量Z丰富的蛋白成分,主要分布于支气管表面和肺泡气液界面上,属C-型胶凝素家族的重要成员,在维持PS的正常生物学功能和调节局部免疫及炎症反应方面发挥重要作用。S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究,SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗大鼠IgG。SABC:1ml(效价1:10,临用前用SABC稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗(大鼠IgG),37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)加生物素化抗大鼠IgG,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]
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即用型IL-1β免疫组化染色试剂盒
- www.biokanu.com即用型小鼠IL-1β免疫组化染色试剂盒产品编号:QD82108试剂的保存:短期于4℃保存,长期于-20℃保存。工作原理IL-1β,白介素1β。在免疫调节和炎症反应过程中起ZX作用。类风湿、结肠炎等病症也和IL-1β的产生过多有关。IL-1α和IL-1β有25%的同源性。合成IL-1β的细胞很广泛,包括单核细胞、巨噬细胞、星形细胞、NK细胞、角化细胞、内皮细胞等。两者合成时都是31KDa的前体,经剪切后成为17.5KDa的成熟蛋白质。IL-1β前体在细胞内合成,并无生物学活性。被IL-1β转化酶(ICE)剪切为成熟形态后排出到细胞外。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究,SP(StreptAvidin-BiotinComplex)大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗兔IgG。SP:1ml(效价1:10,临用前用SP稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗,37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]
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即用型SABC免疫组化染色试剂盒
- www.biokanu.com即用型SABC免疫组化染色试剂盒大鼠IgG使用说明书产品编号:QD82102试剂的保存:短期4℃可保存,长期-20℃。工作原理S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究,SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗大鼠IgG。SABC:1ml(效价1:10,临用前用SABC稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗(大鼠IgG),37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)加生物素化抗大鼠IgG,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在3-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]
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即用型(兔IgG)SABC免疫组化染色试剂盒 (2)
- www.biokanu.com即用型SABC免疫组化染色试剂盒兔IgG使用说明书产品编号:QD82102试剂的保存:短期4℃可保存,长期-20℃。工作原理S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,分子量47000。同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,IP=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究,SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布,本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片,培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液:1ml(效价1:10,临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗:1ml(效价1:10,临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体,标记长臂生物素,生物素标记抗兔IgG。SABC:1ml(效价1:10,临用前用SABC稀释液稀释10倍)。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂:粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS,0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择:用户需根据抗原/抗体的特点确定程序,多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗(兔IgG),37℃2小时左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)加生物素化抗兔IgG,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应,时间一般在3-30分钟之间。达到合适着色强度时(阳性较强,背景较低),即可终止反应(用蒸馏水洗涤切片)。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项:如果染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗涤切片4次,单纯PBS洗2次,然后DAB显色。警告:DAB为可疑致癌物,请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底,容易出现非特异性背景染色,建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片,需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低,因此不得使用过期的试剂盒,不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]
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2018-09-22 10:00
产品样册
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免疫组化染色试剂盒说明书
- 免疫组化染色试剂盒说明书[详细]
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2014-06-23 00:00
课件
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细胞爬片的免疫组化染色的操作步骤
- 细胞爬片的免疫组化染色的操作步骤[详细]
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2013-11-11 00:00
操作手册
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冰冻切片的免疫组化染色操作步骤
- 冰冻切片的免疫组化染色操作步骤1.新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片(也可-80℃保存),厚度为5~6μm。2.载玻片可不打底,裱片后,立即用电吹风吹干。3.如不马上染色,可密封后-20℃保存。4.染色前用冷丙酮在4℃固定10-20分钟。5.PBS洗2次,每次5分钟,(必要时应用0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)6.3%H2O2灭活内源性过氧化物酶,20分钟,避光;7.用PBS洗2次,每次5分钟;8.正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分(保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清(与第二抗体同源动物血清)处理,37℃,15分钟。附:正常血清配制(或按试剂盒规定的浓度配制):按1:20比例,用PBS配制,每张切片需要量按50μ+5μl(10%抛洒量)计算。9.滴加**抗体:用滤纸吸去血清,不洗,直接滴加**抗体,37℃2小时(也可置于4℃冰箱过夜)。10.PBS:5分钟,2次(置于摇床)。11.滴加生物素化的二抗,37℃,40分钟。12.PBS:5分钟,2次(置于摇床)。13.滴加三抗(SAB复合物),37℃,40分钟。14.PBS:5分钟,2次(置于摇床)。15.DAB显色,镜下观察,适时终止(自来水冲终止)。附:DAB的配制①储备液(DAB25mg/ml)的配制:DAB250mg+PBS10ml,待完全溶解后分装成1ml,100μl,50μl,20μl等,-20℃,冻存。②工作液:DAB储备液20μl+PBS1000μl+3%H2O25μl16.自来水(细水)充分冲洗。17.苏木素复染,室温,30秒,自来水冲洗。18.自来水冲洗返蓝,15分钟。19.梯度酒精脱水:80%,2分钟95%,2分钟1**%,2次,5分钟。20.二甲苯透明:I,II(二甲苯)各5分钟21.封片:加拿大树胶(或中性树胶)封片。[详细]
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2018-11-16 10:02
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做好免疫组化染色必须注意的问题
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2024-09-28 00:04
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大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒
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2024-09-28 00:01
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大鼠P物质(SP)检测试剂盒
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2024-09-30 07:28
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大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)检测试剂盒
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2014-09-29 00:00
课件
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大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫试剂盒
- 大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫试剂盒广锐生物-国内高、优Elisa试剂盒供应商本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血管内皮生长因子(VEGF)水平。用纯化的大鼠血管内皮生长因子(VEGF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子(VEGF),再与HRP标记的VEGF抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子(VEGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠血管内皮生长因子(VEGF)浓度。大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫试剂盒操作步骤:标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在**、第二孔中分别加标准品100μl,然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为240ng/L,160ng/L,80ng/L,40ng/L,20ng/L)。加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫试剂盒注意事项:试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准大鼠血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫试剂盒[详细]
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2018-10-23 10:30
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大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒
- 大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒[详细]
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2024-09-28 18:08
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大鼠P物质 (SP)ELISA检测试剂盒
- www.biokanu.com本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断大鼠P物质(SP)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠P物质(SP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠P物质(SP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品(160pg/mL)0.6mL0.6mL按说明书进行稀释标准品稀释液6mL3mL无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:160、80、40、20、10、5pg/mL.试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步骤从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔先加样本稀释液40μL,再加待测样本10μL;随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。2.灵敏度:Zdi检测浓度小于1.0pg/mL。3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。5.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。6.有效期:6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。2.严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。[详细]
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2018-09-22 10:00
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大鼠P物质(SP)ELISA检测试剂盒
- www.biokanu.com本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断大鼠P物质(SP)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠P物质(SP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠P物质(SP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白;预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品(160pg/mL)0.6mL0.6mL按说明书进行稀释标准品稀释液6mL3mL无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:160、80、40、20、10、5pg/mL.试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步骤从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。2.灵敏度:Zdi检测浓度小于1.0pg/mL。3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。5.贮藏:2-8℃,避光防潮保存。6.有效期:6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。2.严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。[详细]
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2018-09-22 10:00
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免疫组化SP法步骤上海联硕生物科技有限公司
- 免疫组化SP法步骤[详细]
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2024-09-28 07:01
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CD90免疫组化试剂盒
- CD90免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测细胞、组织内的特异性CD90抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD90一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。试剂盒所含试剂:试剂A通透液:0.1%Triton-X10010mL(选用)试剂B封闭缓冲液(封闭用)20mL试剂C(原装进口分装)已稀释的即用型CD90一抗(2.5ml)试剂D(原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG1支(浓度1.5mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支(浓度1μM,稀释比1:50~1:200)100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%体积比)2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修复液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL,用10mMNaOH调pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1hr;2.脱蜡:切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修复:根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗涤(2×2min)(具体修法见附1)*注:有些抗原勿需修复,直接进入第5步封闭。5.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育30min;6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2hr或4℃;7.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);8.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育30min;10.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);11.封闭:滴加试剂Tween20,37℃湿盒孵育封闭20min;12.加HRP-SA:滴加用抗体稀释液稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20nM),37℃湿盒中孵育30min;13.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min),TBS洗涤(2×5min);14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;16.封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;17.观察成像:显微镜下观察成像。注意事项:1.修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween20,否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1:抗原修法常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修复液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理,TBS冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或继续微波10~15min,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时4~8min即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]
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2018-10-31 10:00
产品样册
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免疫组化试剂盒说明书
- 免疫组化试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)为基础,可用于检测血液,细胞、组织内的特异性Dazl抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的Dazl一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物,显微镜下观察成像。用户自备试剂:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%体积比)2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修复液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g加蒸馏水700mL,用10mMNaOH调pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤(建议方案):石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1hr;2.脱蜡:切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修复:根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗涤(2×2min)(具体修法见附1)*注:有些抗原勿需修复,直接进入第5步封闭。5.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育30min;6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2hr或4℃过一夜;7.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);8.封闭:滴加试剂B,37℃湿盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育30min;10.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min);11.封闭:滴加试剂Tween20,37℃湿盒孵育封闭20min;12.加HRP-SA:滴加用试剂C稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20nM),37℃湿盒中孵育30min;13.洗涤:TBS-T洗涤(3×5min),TBS洗涤(2×5min);14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;16.封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;17.观察成像:显微镜下观察成像。注意事项:1.修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween20,否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1:抗原修法常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修复液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理,TBS冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或继续微波10~15min,取出微波盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时4~8min即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]
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2018-11-18 10:00
产品样册
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大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒使用说明书
- 大鼠P物质(SP)ELISA试剂盒使用说明书[详细]
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2015-04-15 00:00
实验操作
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