即用型（兔IgG）SABC免疫组化染色试剂盒 （2）

本文由 上海瓦兰生物科技有限公司 整理汇编

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• 即用型（兔IgG）SABC免疫组化染色试剂盒 （2）

  www.biokanu.com即用型SABC免疫组化染色试剂盒兔IgG使用说明书产品编号：QD82102试剂的保存：短期4℃可保存，长期-20℃。工作原理S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究，SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。SABC：1ml（效价1：10，临用前用SABC稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗（兔IgG），37℃2小时左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）加生物素化抗兔IgG,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时间一般在3-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]

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• 即用型SABC免疫组化染色试剂盒

  www.biokanu.com即用型SABC免疫组化染色试剂盒大鼠IgG使用说明书产品编号：QD82102试剂的保存：短期4℃可保存，长期-20℃。工作原理S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究，SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗大鼠IgG。SABC：1ml（效价1：10，临用前用SABC稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗（大鼠IgG），37℃2小时左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）加生物素化抗大鼠IgG,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时间一般在3-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]

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• 即用型IL-1β免疫组化染色试剂盒

  www.biokanu.com即用型小鼠IL-1β免疫组化染色试剂盒产品编号：QD82108试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。工作原理IL-1β，白介素1β。在免疫调节和炎症反应过程中起ZX作用。类风湿、结肠炎等病症也和IL-1β的产生过多有关。IL-1α和IL-1β有25%的同源性。合成IL-1β的细胞很广泛，包括单核细胞、巨噬细胞、星形细胞、NK细胞、角化细胞、内皮细胞等。两者合成时都是31KDa的前体，经剪切后成为17.5KDa的成熟蛋白质。IL-1β前体在细胞内合成，并无生物学活性。被IL-1β转化酶（ICE）剪切为成熟形态后排出到细胞外。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究，SP（StreptAvidin-BiotinComplex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。SP：1ml（效价1：10，临用前用SP稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗，37℃2小时左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项：如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]

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• 即用型大鼠SP-A免疫组化染色试剂盒

  www.biokanu.com即用型SP-A免疫组化染色试剂盒大鼠IgG使用说明书产品编号：QD82105试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。工作原理肺表面活性物质相关蛋白A(pulmonarysurfactant-associatedproteinA,SP-A)是肺表面活性物质(pulmonarysur-factant,PS)中含量Z丰富的蛋白成分,主要分布于支气管表面和肺泡气液界面上,属C-型胶凝素家族的重要成员,在维持PS的正常生物学功能和调节局部免疫及炎症反应方面发挥重要作用。S-Avidin(链霉亲和素)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根据研究，SABC大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗大鼠IgG。SABC：1ml（效价1：10，临用前用SABC稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：粘片剂APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。DAB显色试剂盒。免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。切片常规脱蜡至水。3%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。适当稀释的一抗（大鼠IgG），37℃2小时左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）加生物素化抗大鼠IgG,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。滴加试剂SABC,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]

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• 即用型大鼠VEGF SP免疫组化染色试剂盒

  www.biokanu.com即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒产品编号：QD82178试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。工作原理血管内皮生长因子(VEGF)是相对分子质量为(34～45)×103的同源二聚体糖蛋白。人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据研究，SP（StreptAvidin-BiotinComplex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。试剂盒中内容1.山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。用于组织切片的封闭。2.二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。3.SP：1ml（效价1：10，临用前用SP稀释液稀释10倍）。链酶亲和素-过氧化物酶复合物。用户自备试剂：1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。2.0.01MPBS，0.01M枸橼酸盐缓冲液。3.DAB显色试剂盒。4.免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。石蜡切片染色程序:1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密粘附。2.切片常规脱蜡至水。3.30%H2O21份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。4.酶消化程序:滴加复合消化液5-10分钟。蒸馏水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2次。5.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,不洗。6.适当稀释的一抗，37℃2小时左右或4℃夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）7.加生物素化二抗,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗2分钟×3次。8.滴加试剂SP,37℃30分钟。PBS（pH7.2-7.6）洗5分钟×4次。9.DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各50ul,混匀后加至切片。室温显色,显微镜下观察显色反应，时间一般在5-30分钟之间。达到合适着色强度时（阳性较强，背景较低），即可终止反应（用蒸馏水洗涤切片）。10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。注意事项：1.如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS（pH7.2-7.6）洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后DAB显色。警告：DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。2.热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。3.脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染色，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E脱蜡分开。4.如果将本试剂盒用于肝脏与肾脏等含内源性生物素含量丰富的组织切片，需要进行封闭的特殊处理。5.在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂活性可能降低，因此不得使用过期的试剂盒，不同批号间的试剂盒也不能交叉混用。[详细]

  2018-09-22 10:00

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• 免疫组化染色试剂盒说明书

  免疫组化染色试剂盒说明书[详细]

  2014-06-23 00:00

  课件

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• 兔钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试剂盒

  兔钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试剂盒[详细]

  2024-10-03 11:34

  期刊论文

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• 小鼠/兔IgG|使用说明

  产品简介：货号：SW2040产品名称：Westernblotting（小鼠/兔IgG）规格：一盒储存条件：-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃以方便使用。产品特点：SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。商品货号：产地规格价格SW2040Solarbio1盒1080.00元相关产品：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）A101030%丙烯酰胺(29:1)P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液D106010×电泳转移缓冲液PR1920彩虹245广谱蛋白markerPR1700预染次高分子量蛋白markerSW3010膜封闭液DA1010DAB显色试剂盒（20×）PE0010ECLPlus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)优质试剂！质量放心！价格Zdi!为ZG生物产业做贡献欢迎新老客户咨询[详细]

  2018-09-02 10:00

  产品样册

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• 细胞爬片的免疫组化染色的操作步骤

  细胞爬片的免疫组化染色的操作步骤[详细]

  2013-11-11 00:00

  操作手册

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• 冰冻切片的免疫组化染色操作步骤

  冰冻切片的免疫组化染色操作步骤1.新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片（也可-80℃保存），厚度为5～6μm。2.载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。3.如不马上染色，可密封后-20℃保存。4.染色前用冷丙酮在4℃固定10-20分钟。5.PBS洗2次，每次5分钟，（必要时应用0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔）6.3%H2O2灭活内源性过氧化物酶，20分钟，避光;7.用PBS洗2次，每次5分钟;8.正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分（保持组织呈湿润状态,）滴加正常山羊或兔血清（与第二抗体同源动物血清）处理，37℃，15分钟。附：正常血清配制（或按试剂盒规定的浓度配制）：按1:20比例，用PBS配制，每张切片需要量按50μ+5μl（10%抛洒量）计算。9.滴加**抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加**抗体，37℃2小时（也可置于4℃冰箱过夜）。10.PBS：5分钟，2次（置于摇床）。11.滴加生物素化的二抗，37℃，40分钟。12.PBS：5分钟，2次（置于摇床）。13.滴加三抗（SAB复合物），37℃，40分钟。14.PBS：5分钟，2次（置于摇床）。15.DAB显色，镜下观察，适时终止（自来水冲终止）。附：DAB的配制①储备液（DAB25mg/ml）的配制：DAB250mg+PBS10ml，待完全溶解后分装成1ml，100μl，50μl，20μl等，-20℃，冻存。②工作液：DAB储备液20μl+PBS1000μl+3%H2O25μl16.自来水（细水）充分冲洗。17.苏木素复染，室温，30秒，自来水冲洗。18.自来水冲洗返蓝，15分钟。19.梯度酒精脱水：80%，2分钟95%，2分钟1**%，2次，5分钟。20.二甲苯透明：I，II（二甲苯）各5分钟21.封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片。[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 做好免疫组化染色必须注意的问题

  做好免疫组化染色必须注意的问题[详细]

  2024-09-28 00:04

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• 兔免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒使用说明书

  兔免疫球蛋白G（IgG）ELISA试剂盒使用说明书l本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中兔免疫球蛋白G（IgG）的含量。l有效期：6个月l保存条件：2-8℃l本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被兔免疫球蛋白G（IgG）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔免疫球蛋白G（IgG）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。样本处理及要求1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过一夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶YZ剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。Z后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。4.细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响Z后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本处理1.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。2.实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。3.若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。4.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。5.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。6.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。7.建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。需要而未提供的试剂和器材酶标仪（450nm）高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱蒸馏水或去离子水试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板8孔×12条8孔×6条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无备注：1.标准品浓度依次为：24、12、6、3、1.5、0mg/mL2.经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过Zda标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。注意事项严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。在储存和温育时避免强光直接照射。平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。不能使用过期产品。如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。试剂准备试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。实验结果计算以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。试剂盒性能1.检测范围：0.75mg/mL24mg/mL。2.灵敏度：Zdi检测浓度小于0.1mg/mL。3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%。说明1.由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。2.Z终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。3.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。4.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到**的检测结果。问题解答若实验效果不好，请及时对显色结果拍照，保留所用板条及未使用试剂，并妥善保存，然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料：问题可能原因解决方案标准曲线差吸取及洗涤不充分充分的吸取及洗涤移液不极ng确检查和校正移液器精密度低洗涤不充分按说明书要求充分洗涤和浸泡混匀不充分和吸取试剂不足充分混匀和吸取试剂重复利用吸头、容器和覆膜使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜加样不极ng确检查和校正移液器O.D值低每孔加的试剂量不极ng确校正移液器，极ng确加入试剂温育时间不正确保证充足的温育时间温育温度不正确试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度酶标记物或底物失效通过混合酶标记物和底物，颜色应迅速显现来检查没有加入终止液按照说明书实验操作步骤加入终止液超出读数时间读数在说明书推荐的读数时间内读数样本值不正确的样本储存方式正确储存样本，使用新鲜样本进行实验不正确的样本收集和处理方法采取正确的样本收集和处理方法待测物质在样本中含量低使用新鲜样本，重复实验[详细]

  2018-11-16 10:02

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• 兔（Rabbit）圆环病毒2型（CV-2）

  检测原理试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被圆环病毒2型（CV-2）IgG抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中圆环病毒2型（CV-2）的存在与否。[详细]

  2018-12-02 10:00

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• CD90免疫组化试剂盒

  CD90免疫组化试剂盒该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性CD90抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD90一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1%Triton-X10010mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型CD90一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG1支（浓度1.5mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃；7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-10-31 10:00

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• 免疫组化试剂盒说明书

  免疫组化试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性Dazl抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的Dazl一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃过一夜；7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附1：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 兔血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒

  兔血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-13 00:00

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• 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒

  人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-06 00:00

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• 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)检测试剂盒

  人丁型肝炎IgG(HDV IgG)检测试剂盒[详细]

  2024-09-18 18:09

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• 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒

  人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA试剂盒[详细]

  2024-09-27 23:58

  课件

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• 小鼠 Thy1 免疫组化试剂盒

  小鼠ELISA试剂盒该试剂盒以HRP标记的链霉亲和素复合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性Thy1抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的Thy1一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特异一抗生物素化二抗HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。试剂盒所含试剂：试剂A通透液：0.1%Triton-X10010mL（选用）试剂B封闭缓冲液（封闭用）20mL试剂C（原装进口分装）已稀释的即用型Thy1一抗（2.5ml）试剂D（原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG1支（浓度1.5mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50μL+抗体稀释液20ml试剂EHRP-SA复合物1支（浓度1μM，稀释比1:50~1:200）100μL试剂FDAB显色液5ml用户自备试剂：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷1.21g氯化钠7.6g加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%体积比）2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mMpH6.0柠檬酸缓冲液柠檬酸0.38g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修复液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g柠檬酸三钠2.45g加蒸馏水700mL，用10mMNaOH调pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.缓冲甘油封固剂10mL4.Tween205mL石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）：石蜡包埋组织切片3~4μm厚度1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗涤（2×2min）（具体修法见附1）*注：有些抗原勿需修复，直接进入第5步封闭。5.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育30min；6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃7.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；8.封闭：滴加试剂B，37℃湿盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育30min；10.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min）；11.封闭：滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；12.加HRP-SA：滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20nM），37℃湿盒中孵育30min；13.洗涤：TBS-T洗涤（3×5min），TBS洗涤（2×5min）；14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；17.观察成像：显微镜下观察成像。小鼠ELISA试剂盒注意事项：1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。4.封片前一定要换用TBS充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween20，否则会影响结果观察。5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。附11：抗原修法常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修复液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修复法切片脱蜡水化处理，TBS冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS冲洗即可。二、微波抗原修复法微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或继续微波10~15min，取出微波盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，须自行调整。三、直接高压抗原修复法取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min即可脱离热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。四、隔水式高压抗原修复法不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时4~8min即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。[详细]

  2018-09-27 10:00

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