凝胶电泳操作注意事项

本文由 上海士锋生物科技有限公司 整理汇编

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• 凝胶电泳操作注意事项

  凝胶电泳操作注意事项[详细]

  2015-05-20 00:00

  标准

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• 凝胶电泳

  以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，但适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广，介绍如下：⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的检测。⒉琼脂糖凝胶电泳分离核酸的基本技术在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中，DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比；分子构型也对迁移率有影响，如共价闭环DNA＞直线DNA＞开环双链DNA。当凝胶浓度太高时，凝胶孔径变小，环状DNA（球形）不能进入胶中，相对迁移率为0，而同等大小的直线DNA（刚性棒状）可以按长轴方向前移，相对迁移率大于0。⑴设备与试剂：琼脂糖凝胶电泳分为垂直及水平型两种。其中水平型可制备低浓度琼脂糖凝胶，而且制胶与加样都比较方便，故应用比较广泛。核酸分离一般用连续缓冲体系，常用的有TBE（0.08mol/lTrisHCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/lEDTA）和THE（0.04mol/lTrisHCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸钠，0.0018mol/lEDTA）。⑵凝胶制备：用上述缓冲液配制0.5％-0.8％琼脂糖凝胶溶液，沸水浴或微波炉加热使之融化，冷至55℃时加入溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5/ml，然后将其注入玻璃板或有机玻璃板组装好的模子中，厚度依样品浓度而定。注胶时，梳齿下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脱凝固后，取出梳子，加入适量电极缓冲液使板胶浸没在缓冲液下1mm处。⑶样品制备与加样：溶解于TBE或THE内的样品应含指示染料（0.025％溴酚蓝或桔黄橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％FicoⅡ增加比重，使样品集中，每齿孔可加样5-10。⑷电泳：一般电压为5-15V/cm。对大分子的分离可用电压5V/cm。电泳过程**在低温条件下进行。⑸样品回收：电泳结束后在紫外灯下观察样品的分离情况，对需要的DNA分子或特殊片段可从电泳后的凝胶中以不同的方法进行回收，如电泳洗脱法：在紫外灯下切取含核酸区带的凝胶，将其装入透析袋（内含适量新鲜电泳缓冲液），扎紧透析袋后，平放在水平型电泳槽两电极之间的浅层缓冲液中，100V电泳2-3小时，然后正负电极交换，反向电泳2分钟，使透析袋上的DNA释放出来。吸出含DNA的溶液，进行酚抽提、乙醇沉淀等步骤即可完成样品的回收。其它还有低融点琼脂糖法、醋酸铵溶液浸出法、冷冻挤压法等，但各种方法都仅仅有利于小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，随着DNA分子量的增大，回收量显著下降。[详细]

  2018-09-28 10:00

  产品样册

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  丙烯酰胺凝胶电泳说明书[详细]

  2011-12-08 00:00

  应用文章

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• 盐雾试验箱操作注意事项

  盐雾试验箱操作注意事项[详细]

  2011-11-07 00:00

  操作手册

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• 密封试验仪操作注意事项

  密封试验仪操作注意事项[详细]

  2016-06-15 00:00

  应用文章

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• 扭力扳手操作注意事项

  不知道大家对扭力扳手熟不熟悉，其实它的操作也是有讲究的，工作人员在操作扭力扳手的过程中，需注意以下6点，想了解更多扭力扳手操作注意事项的用户可以点击资料下载。本文由扭力扳手：266895/list_857557.html友情提供阅读本文的还阅读：东日扭力扳手扭力扳手价格定扭矩电动扳手扭力检测仪拉力测试仪数显推拉力计[详细]

  2018-10-23 10:31

  产品样册

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• 移液器操作注意事项

  移液器操作注意事项移液器是生物\化学实验室常用的小容量移取液体的单道微量移液器。　　移液器的使用　　1、选择量程合适的移液器：移液器只能在特定量程范围内准确移取液体，如超出Zdi或Zda量程，会损坏移液器并导致计量不准；　　　　2、设定容量值　　　　粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值；　　　细调，当容量值接近设定值以后，应将移液器刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响；　　　　设定容量值时的注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可。但如果要从小体积调为大体积时，则应先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的Z高极ng确度。在设定容量值的过程中，禁止将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液器。　　　　3、吸液嘴（枪头）的装配：把白套筒顶端插入吸液嘴，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转至吸液嘴卡紧。切记用力不能过猛，更不能采取剁吸头的方法来进行安装。吸液嘴卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。　　4、预洗吸液嘴：在安装了新的吸液嘴或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度；　　5、吸液：先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住塞杆顶端的按钮，向下按到**停点，再将吸头垂直浸入液面2~3mm，缓慢平稳松开按钮，吸上液体，并停留1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）；　　　6、移液：缓慢抬起移液器取出吸液嘴，确保吸液嘴外壁无残留液体。可用定性滤纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿触及吸液嘴口；　　　　7、目测吸入的液体体积是否合理；　　　　8、放液：将吸液嘴贴到容器内壁并保持20°-40°倾斜，平稳地把按钮压到**停点，停1-2s（粘性大的液体要加长停留时间）后，继续按压到第二停点，排出残余液体。松开按钮，然后将吸液嘴沿着内壁向上移开；　　　9、按吸头弹射器除去吸头，吸取不同样本液体时必须更换吸头；河南信诺仪器设备有限公司产品服务宗旨：●向用户提供持续、GX、快捷的服务，构建优质服务品牌；●建立完善的服务网络，向用户提供专业化、标准化、多元化，产品化服务；河南信诺仪器设备有限公司售后服务宗旨：●终身提供维修及维护服务，终身负责零配件的及时供应；●终身免费提供技术咨询及技术支持服务；[详细]

  2018-11-28 10:00

  产品样册

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• 气相色谱仪操作注意事项

  气相色谱仪操作注意事项[详细]

  2024-09-28 10:49

  课件

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• 等电聚焦凝胶电泳产品样册

  等电聚焦凝胶电泳产品样册[详细]

  2016-10-20 09:05

  期刊论文

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• 电子天平操作使用注意事项

  电子天平操作使用注意事项[详细]

  2013-11-12 00:00

  安装说明

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• 高低温试验箱操作注意事项

  高低温试验箱操作注意事项[详细]

  2012-06-19 00:00

  应用文章

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• 生物安全柜的操作注意事项

  生物安全柜的操作能够做为培养物，菌毒株以及诊断性的标本，具备感染性的实验材料，用来保护操作者，实验室以及实验材料。能够有效的避免在操作过程中，可能会出现的溶胶设溅出的生物体，生物安全柜在操作中需要注意些什么呢？现在就来好好的看看。 一，操作之前，针对本次操作所需的全部物品移入到安全柜中，避免双臂频繁穿过破坏气流，并且在移入到前用百分之七十使用酒精进行表面擦拭，用来消除污染。 二，打开风机五到十分钟时间，等到生物安全柜气流稳定之后，再次进行操作，将双臂缓缓的伸入到安全柜中，至少要静止一分钟时间，帮助生物安全柜稳定之后在进行操作。 三，生物安全柜不放置在实验无关的物品，安全柜摆放在洁净区域，半污染区域和污染区域进行基本的区分。操作过程中，不需要担心三区域划分，物品应该尽量前后放置，避免挡住气道口，以免干扰到正常的空气气流。 四，进行操作之时，还需要注意的是划分清洁区域和污染区域，避免出现交叉性感染。能够防止溅出液滴，可以在柜台上铺设用消毒剂浸泡的纱布和毛巾，但是不能够完全覆盖安全柜的格栅。 五，生物安全柜进行操作期间，严禁使用酒精等明火设备，有效的避免热量产生气流，干扰柜体内部的稳定性，明[详细]

  2018-04-17 18:36

  实验操作

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• ODE电磁阀操作注意事项

  ODE电磁阀操作注意事项ODE电磁阀主要成分：体与主端口，连同套筒组件可动芯+（常闭试剂盒），线圈。操作：电磁阀2路常闭直接命令具有嵌合入口和使用的嵌合。可动铁芯，在其上的密封垫被安装密封，提供了直接打开和关闭的电磁阀的主要端口。当线圈未通电，以便关闭可动铁芯处于位置端口不允许流体通过。然而，当线圈通电时，可动铁芯在这样的位置，以打开该端口允许流体的通道移动。注意事项：在此范围内的电磁阀，压力增加导致力的增加以打开阀如果供应和使用之间的压力差是必需的比其设计电磁阀上的Zda值高，后者可甚至在线圈通电打开。1.2电磁2通常开的直动式主要成分：体与所述主端口与套筒可动芯+++试纸组件一起衬垫保持器（常开的试剂盒），线圈。操作：常开电磁阀直动式2路有一个配件进入和使用的配件。通过对杆作用在移动核心衬垫保持承诺打开和关闭电磁阀。当线圈不馈，所述衬垫保持器，一个弹簧的作用下，被保持在适当的位置使得端口出现打开，允许流体通过。但是，当卷轴被提供时，可动铁芯向下移动，并通过该杆，推动在作为这样的位置衬垫保持器以关闭端口，不允许通道的流体。注意事项：在这家电磁阀，压力增加导致力的增加以打开阀如果供应和使用之间的压力差是必需的比其设计电磁阀上的Zda值高，后者可不用重启也断电线圈。ODE电磁阀操作注意事项ODE电磁阀操作注意事项[详细]

  2018-09-21 10:00

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  2024-09-27 23:46

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  离心操作的注意事项[详细]

  2024-09-28 00:31

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  气相色谱仪操作使用注意事项[详细]

  2024-09-19 05:00

  实验操作

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• 电子比重计操作注意事项

  电子比重计操作注意事项[详细]

  2024-09-21 05:28

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• 变性梯度凝胶电泳系统说明书

  变性梯度凝胶电泳系统说明书[详细]

  2010-01-04 00:00

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• 彗星实验凝胶电泳产品样册

  彗星实验凝胶电泳产品样册[详细]

  2024-09-28 21:32

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• 微量紫外分光光度计操作注意事项

  微量紫外分光光度计操作注意事项[详细]

  2014-11-10 00:00

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