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细胞培养平台
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本文由 北京慧宇诚越科技发展有限公司 整理汇编
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细胞培养
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选购指南
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细胞培养常规检查
- 细胞培养常规检查(一)一般形态观察生长状态良好的细胞在普通显微镜下观察时可见,细胞透明度大,轮廓不清,只有用相差显微镜观察,才能看清细胞的细微结构。细胞内颗粒少、无空泡,胞膜清晰,培养上清液清澈透明,看不到悬浮细胞和碎片;细胞功能不良时,轮廓增强,胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物,细胞之间空隙加大,细胞形态可变得不规则,甚至失去原有特点。只有生长状态良好的细胞才能用于实验。细胞生长过程中,CO2积累增多,由于培养液内含有pH指示剂,因此其颜色变化可间接反映细胞的生长状态。正常情况下,培养液呈桃红色;呈橙黄色时,细胞一般生长状态较好;呈淡黄色,则可能是培养时间过长、营养不足、细胞死亡过多;呈紫红色,则可能是细胞生长状态不好,或已死亡。(二)细胞增殖生长状态初代或传代培养时,都有一长短不同的潜伏期。传代细胞系、胚胎组织或幼体组织潜伏期短,一般在第二天即可见细胞生长,一周内便可连接成片。成体组织的潜伏期长,老龄组织和癌组织更长,有时可达一周左右。初代组织块培养法细胞生长,Zxian从组织“长”出的为游走细胞,它们多单独活动,形态不规则,用缩时逐格显微摄电影法可显示出极活跃的变形、游走和吞噬活动。在游走细胞之后,接着长出的是成纤维细胞或上皮细胞。只有当出现细胞分裂、细胞数量逐渐增多、形成较大生长晕或连接成片时,细胞才真正进入增殖状态。成纤维细胞是Z易生长细胞,生长速度较快,低倍镜下观察时,前哨部位细胞似火焰状或放射形状向外扩展;如接种为游走细胞、胶质细胞等细胞,在密度不大时,可连接成网状,只有细胞密度增大时才连接成片。上皮细胞排列紧密,相互接壤成膜状;上皮膜边缘整齐,细胞很少单独活动,生长时整个上皮膜发生移动。上皮细胞尤其是外胚层来源的细胞如表皮细胞等,生长过程中常产生溶解酶,能使细胞间质发生液化,导致细胞相互分离,严重时可导致细胞脱落,其确切机制尚不明了.可能与产生透明质酸酶有关。细胞接种后,经过悬浮期、潜伏期和指数增生期等后,Z终将长满瓶壁,如不及时做再培养,由于营养物质消耗和代谢产物积累,细胞即进入停滞期。此时细胞轮廓增强,细胞内常出现前述有膨胀线粒体形成的堆积物,细胞变得粗糙,严重时细胞从瓶壁脱落,只有及时做传代,才能使细胞继续生长。(三)微生物污染在长时间反复培养过程中,即使细胞培养用品消毒操作严密,也会偶尔发生细菌、支原体、真菌、病毒和其他杂质细胞污染,需随时注意,一旦发生污染,应及时进行处理。(四)培养液在正常情况下,培养液pH介于7.2~7.4,呈红色。用一般培养箱培养时,随细胞生长时间延长,CO2积累增多,在超过缓冲范围之后,营养液酸化逐渐变黄色,这时如不及时调节pH,会对细胞产生不利影响,严重时可使细胞退变死亡。培养液中加N-(2-羟乙基)N’-2-乙烷磺酸(N-2Hydroxyethylpiperazme-N’-2-ethanesulionicacid,HEPES)或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定。用含磷酸盐缓冲系统培养液时,可因瓶口漏气,CO2溢出,也可能由于培养瓶塞洗刷不洁,残留碱性物质所致,使之变为碱性而呈红色。更换营养液的时间,可依据营养物质的消耗而定,细胞生长旺盛时,2~3d更换一次;生长缓慢时,3~4d更换为宜。需特别注意,各种细胞对pH的要求不同。[详细]
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2024-10-03 18:27
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