小鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）试剂盒使用方法

本文由 上海沪峰化工有限公司 整理汇编

2018-09-19 10:01 569阅读次数

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• 小鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）试剂盒使用方法

  检测范围：96T1ng/ml-45ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平。用纯化的小鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），再与HRP标记的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（80ng/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）试剂盒原理

  大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）试剂盒原理[详细]

  2015-05-05 00:00

  实验操作

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• 人α平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） ELISA试剂盒说明书

  人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒试验原理：α-SMA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知α-SMA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将α-SMA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中α-SMA的浓度呈比例关系。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的α-SMA标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的α-SMA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)ELISA试剂盒检测值范围：0-80ng/ml4、敏感度：0.1ng/ml[详细]

  2018-09-14 10:00

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• 大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）试剂盒使用说明方法

  检测范围：96T2.5ng/ml-80ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠人α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平。用纯化的大鼠人α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），再与HRP标记的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）浓度。[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  网站所有产品的报价仅为市场简单报价，根据规格不同，实际报价也会不同，详细价格请打电话向销售咨询！[详细]

  2018-10-03 10:00

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• 大鼠α平滑肌肌动蛋白试剂盒说明书

  大鼠α平滑肌肌动蛋白试剂盒说明书[详细]

  2024-09-20 13:38

  选购指南

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• 大鼠α平滑肌肌动蛋白酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠人α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平。用纯化的大鼠人α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），再与HRP标记的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）浓度。[详细]

  2018-10-03 10:00

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• 人F-肌动蛋白elisa试剂盒使用方法

  本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T0.1μmol/ml-10μmol/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中F-肌动蛋白(F-actin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人F-肌动蛋白(F-actin)水平。用纯化的人F-肌动蛋白(F-actin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入F-肌动蛋白(F-actin)，再与HRP标记的F-肌动蛋白(F-actin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的F-肌动蛋白(F-actin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人F-肌动蛋白(F-actin)浓度。[详细]

  2018-12-30 10:00

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• 小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒

  小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-09 00:00

  操作手册

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• 小鼠CD44试剂盒使用方法

  检测范围：96T1μg/L-32μg/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中CD44含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠CD44水平。用纯化的小鼠CD44抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CD44，再与HRP标记的CD44抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的CD44呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠CD44浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（64μg/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠c-fos试剂盒使用方法

  检测范围：96T20pg/ml-480pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入c-fos，再与HRP标记的c-fos抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（960pg/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-10-03 10:00

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• 小鼠白细胞介素试剂盒使用方法

  小鼠白细胞介素试剂盒使用方法[详细]

  2024-09-29 01:25

  应用文章

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• α-SMA免疫组化ELISA试剂盒说明

  α-SMA免疫组化ELISA试剂盒说明[详细]

  2024-09-29 06:59

  选购指南

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• 小鼠黑色素（MC）试剂盒使用方法

  检测范围：96T1ng/L-32ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中黑色素(MC)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠黑色素(MC)水平。用纯化的小鼠黑色素(MC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入黑色素(MC)，再与HRP标记的黑色素(MC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的黑色素(MC)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠黑色素(MC)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（64ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。32ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液16ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液8ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液4ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液2ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠γ干扰素（IFN-γ）试剂盒使用方法

  检测范围：96T30ng/L-800ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的小鼠γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠γ干扰素(IFN-γ)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（1600ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠环孢素A（CsA）试剂盒使用方法

  检测范围：96T4ng/mL-120ng/mL使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中环孢素A(CsA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠环孢素A(CsA)水平。用纯化的小鼠环孢素A(CsA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环孢素A(CsA)，再与HRP标记的环孢素A(CsA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的环孢素A(CsA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠环孢素A(CsA)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（240ng/mL）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠胶原酶Ielisa试剂盒使用方法

  检测范围：96T3ng/ml-85ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胶原酶I(CollagenaseI)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胶原酶I(CollagenaseI)水平。用纯化的小鼠胶原酶I(CollagenaseI)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胶原酶I(CollagenaseI)，再与HRP标记的小鼠胶原酶I(CollagenaseI)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的胶原酶I(CollagenaseI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胶原酶I(CollagenaseI)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（160ng/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

  产品样册

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• 小鼠胃动素（MTL）试剂盒使用方法

  检测范围：96T20pg/ml-480pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胃动素(MTL)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胃动素(MTL)水平。用纯化的小鼠胃动素(MTL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胃动素(MTL)，再与HRP标记的胃动素(MTL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃动素(MTL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胃动素(MTL)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（960pg/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠白介素1β （IL-1β）试剂盒使用方法

  检测范围：96T2.5ng/L-80ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素1β(IL-1β)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素1β(IL-1β)水平。用纯化的小鼠白介素1β(IL-1β)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素1β(IL-1β)，再与HRP标记的白介素1β(IL-1β)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素1β(IL-1β)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白介素1β(IL-1β)浓度。[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 小鼠dickkopf4（DKK4）试剂盒使用方法

  检测范围：96T0.8μg/L-20μg/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中dickkopf4（DKK4）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠dickkopf4（DKK4）水平。用纯化的小鼠dickkopf4（DKK4）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入dickkopf4（DKK4），再与HRP标记的dickkopf4（DKK4）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的dickkopf4（DKK4）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠dickkopf4（DKK4）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（40μg/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个[详细]

  2018-10-03 10:00

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