GX表达与蛋白制备

本文由 默克化工技术（上海）有限公司广州分公司 整理汇编

2015-04-02 00:00 168阅读次数

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  GX表达与蛋白制备[详细]

  2015-04-02 00:00

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• BT产品应用（32）快速GX地筛选高表达重组蛋白的哺乳动物细胞

  ClonePix系统的技术可以挑选出高表达分泌蛋白的细胞。借助荧光偶联抗体，通过荧光成像和精密的机械设计筛选并挑取分泌表达单体蛋白的CHO细胞和HEK293细胞可以显著提升工作效率，精简工作流程，ZZ获得高表达目标蛋白的优质细胞株。[详细]

  2024-09-18 18:09

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  主要用途载玻片细胞胶原蛋白I（COLLAGENI）蛋白表达荧光显微镜检测试剂是一种旨在运用抗胶原蛋白I型单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过荧光显微镜分析胶原蛋白I型表达水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体等）的胶原蛋白I型分析。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。技术背景胶原蛋白（collagen）是一种纤维蛋白，存在于所有动物组织中，由纤维组织母细胞（fibroblast）合成，构成体内总蛋白含量的三分之一，是血管、心脏、肾脏、肝脏、皮肤、韧带、骨和软骨组织细胞外基质（extracellularmatrix）的主要成分。胶原蛋白分子由三个多肽链组成，其中含有三种氨基酸：甘氨酸（glycine）、脯氨酸（proline）、羟脯氨酸（hydroxyproline）。胶原蛋白由29种类型，其中90%是细纤维形成填隙式胶原（I、II、III和V型）和基底膜胶原（IV型）。I型胶原蛋白是体内Z为丰富，存在于疤痕组织、腱（tendon）、动脉血管壁、皮肤、骨组织、牙组织、肌原纤维（myofibrils）的肌内膜（endomysium）、纤维软骨（fibrocartilage）等。其异常将导致成骨不全（OsteogenesisImperfecta）、Ehlers-Danlos综合征（EDS）又名弹力过度性皮肤（cutishyperelastica）、婴儿骨皮质增生症（infantilecorticalhyperostosis）等疾患。[详细]

  2018-11-18 10:00

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  细胞样品细胞色素C蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞样品细胞色素C蛋白表达流式细胞仪检测试剂是一种旨在使用抗细胞色素C单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，通过双重参数细胞流式仪定量检测样品中细胞色素C表达水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体、植物等）的细胞色素C表达水平的测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。技术背景细胞色素C（CYTOCHROMEC）在细胞凋亡中扮演着重要作用。细胞色素C位于线粒体内外膜之间。当细胞凋亡时，它从线粒体内释放到细胞浆里，引起一系列的信号通道的下游反应。通常使用免疫组化方法定量或定性检测细胞色素C的蛋白表达水平标记。流式细胞术（FLOWCYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。[详细]

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  动物肝星状细胞标记蛋白DESMIN表达免疫组化检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物肝星状细胞标记蛋白DESMIN表达免疫组化检测试剂是一种旨在使用免疫抗体显色技术，即通过抗DESMIN多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，分析肝星状细胞DESMIN蛋白表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、大鼠、小鼠等肝星状细胞标记蛋白DESMIN蛋白检测。广泛用于肝星状细胞鉴定、肝脏发育、肝纤维化病变的研究。产品严格无菌，即到即用，显色清晰，操作简捷，性能稳定。技术背景肝星状细胞（Hepaticstellatecells；HSC），也称为Ito细胞、窦周细胞（perisinusoidalcell）、维生素A储存细胞、脂肪细胞、或脂肪储存细胞。其位于实质细胞（parenchymalcell）和内皮细胞（endotheriallining）之间，具有维甲类化合物代谢、储存和体内平衡、胞外基质重建、生长因子和细胞因子的制造、窦腔收缩和舒张、肝组织发育和再生的功能，与肝纤维化的发生、门静脉高压（portalhypertension）和肿瘤转移有关。结蛋白（desmin）属于第三类中间丝蛋白（intermediatefilaments），在1984年由Yokoi等发现在肝星状细胞表达，成为其标记蛋白之一，也是识别肝星状细胞的金标准。进一步研究发现：1）结蛋白在正常大鼠门静脉周围（periportal）细胞呈阳性，而在ZY静脉（pericentral）周围50%呈阴性；2）小鼠肝脏发育过程中，结蛋白阳性的肝星状细胞在肝实质（parenchyma）散在分布；3）结蛋白阳性的肝星状细胞分布在狄氏窦周间隙（perisinusoidalspaceofDisse）的沿边分区（littoralcompartment）；4）大鼠静止型（quiescent）肝星状细胞结蛋白阳性，而人体静止型为阴性；5）分离培养的肝星状细胞结蛋白呈阳性；6）肝星状细胞转分化（transdifferentiation）成肌成纤维细胞（myofibroblast）过程中，结蛋白阳性；7）α-SMA和GFAP也是肝星状细胞的标记蛋白。通过抗结蛋白多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidaseconjugatedantibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示结蛋白阳性肝星状细胞为棕褐色。[详细]

  2018-11-08 10:00

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  常用培养基制备、灭菌与消毒　　制备、灭菌与消毒：　　一、实验目的　　了解培养基的配制原理;掌握配制培养基的一般方法和步骤;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤CJ的操作方法。　　二、实验原理　　培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。　　牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用Z广泛和Z普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的Z基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。　　干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。　　三、试剂与器材　　1.器材　　试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。　　2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂　　四、实验内容　　1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查　　2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物　　3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查　　4.过滤CJ：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌　　五、关键步骤及注意事项　　1.要严格按配方配制。　　2.调pH不要过头。　　3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70C以下放物、取物。　　4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。　　5.过滤CJ要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。[详细]

  2018-09-27 10:00

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  上海哈灵生物科技有限公司HL40029v.A抗体/蛋白HRP标记制备试剂盒产品说明书主要用途抗体/蛋白HRP标记制备试剂是一种旨在通过高碘酸氧化产生活化的辣根过氧化酶，与抗体或蛋白中氨基偶联反应，进一步还原和中和作用，确保复合体的稳定的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种种系的抗体、纯化蛋白的HRP标记。其应用于后续WESTERNBLOT、免疫组化、ELISA等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，反应敏感，重复性好。技术背景辣根过氧化酶，分子量44Kd，常作为标记，用于免疫反应的定量检测（enzymeimmunoassay；EIA），例如免疫印迹WESTERNBLOT、免疫检测ELISA和免疫化学染色immunohistochemicalstaining等。辣根过氧化酶具有价廉、高纯、高特异活性、稳定等优点，成为主要的（占80％）抗体或蛋白缀和标记酶。基于辣根过氧化酶为糖蛋白，含有8个糖链，通过高碘酸避光氧化，使羟基和醛基分离后，活化的HRP既不失活，又能在碱性条件下，与所有蛋白或抗体存在的氨基进行偶联反应，形成席夫碱（Schiff'sbases），进而在酸性透析处理后去除剩余的高碘酸和预防自偶联。经过温和的硼氢化氰钠（sodiumcyanoborohydride）还原水合作用，以及乙醇胺（ethanolamine）或2-巯基乙胺（2-mercaptoethylamine）中和残余的醛基，使标记蛋白/抗体更加稳定。产品内容缓冲液（ReagentA）1毫升标记液（ReagentB）50微升还原液（ReagentC）200微升中和液（ReagentD）50微升保存液（ReagentE）1毫升产品说明书1份保存方式保存在－20℃冰箱里；有效保证6月用户自备目标抗体或蛋白：用于HRP标记1.5毫升离心管：用于样品反应操作和保存的容器震荡器：用于混匀反应物实验步骤移取10微升（总量100微克）用户自备的目标抗体或蛋白（分子量在160Kd左右或以下）加入90微升缓冲液（ReagentA），混匀加入10微升标记液（ReagentB），混匀室温下（25℃）孵育1小时或4℃冰箱里孵育16小时加入10微升还原液（ReagentC），混匀室温下孵育15分钟加入10微升中和液（ReagentD），混匀室温下孵育15分钟加入130微升保存液（ReagentE），混匀获得标记蛋白或抗体终浓度0.6毫克/毫升即刻放进-70℃保存或置于冰槽里备用或继续后续ELISA、WESTERNBLOT、IMMUNOHISTOLOGY等注意事项本产品为5次（100微克/次）操作操作时，须戴手套样品中避免含有叠氮化钠（sodiumazide）、Tris、甘氨酸（glycine）、氢氧化铵（NH4OH）等，否则干扰标记如果标记液（ReagentB）没有充分溶解，可以放在4℃冰箱里72小时或更长时间后使用如果需要增加标记量，则相应增加试剂用量如果标记500Kd以上的蛋白或抗体，则使用20微升标记液（ReagentB）即可标记效率取决于目标蛋白或抗体与活化HRP的分子摩尔浓度比例和结构关系HRP标记蛋白复合体在4℃温度下保持4周稳定；在－20℃温度下，保持6个月稳定标记抗体后续应用建议用量如下：应用标记抗体浓度ELISA250纳克/毫升至2.5微克/毫升WESTERNBLOT0.5微克/毫升至50微克/毫升IMMUNOHISTOLOGY2.0微克/毫升至5.0微克/毫升本公司提供系列蛋白/抗体标记试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定不含污染性蛋白酶[详细]

  2018-11-19 10:00

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