高压灭菌器做九管法灭菌时如何避免气泡残留在培养基

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• 高压灭菌器做九管法灭菌时如何避免气泡残留在培养基

  大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。而检测食品中大肠菌群的方法中，国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准，国家标准的三步九管法，即乳糖发酵试验、分离培养、证实试验。由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。1.乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。2.分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。3.证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。在试验过程中，会用到高压灭菌器来进行灭菌，九管法灭菌时，大肠菌在高温下会产生气泡，如果用的是ALP高压力灭菌锅，可以通过进入工程师菜单，调整在升温过程中的排气时间，可以有效的排走残留在培养基中的气泡。[详细]

  2024-09-11 19:53

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  培养基的灭菌及准备B．1大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）培养基的灭菌及准备B．1.1培养基采用大豆酪蛋白琼脂培养基，可以按以下制备，也可使用按该生产的符合要求的脱水培养基。配制后按培养基规定的经验证合格的灭菌程序灭菌。B．1.2大豆酪蛋白琼脂培养基配方酪蛋白胰酶消化物…………………………………………………………………15g大豆粉木瓜蛋白酶消化物…………………………………………………………5g氯化钠………………………………………………………………………………5g琼脂…………………………………………………………………………………15g纯化水……………………………………………………………………………1000mL取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.2，加入琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20mL至无菌平皿（φ90mm1））中。加盖后在室温放至凝固。B．2沙氏琼脂培养基（SDA）培养基的灭菌及准备葡萄糖………………………………………………………………………………40g酪蛋白胰酶消化物、动物组织的胃酶消化物等量混合…………………………10g琼脂…………………………………………………………………………………15g纯化水……………………………………………………………………………1000mL取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌后为5.6±0.2，加入琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20mL至无菌平皿（φ90mm1））中。加盖后在室温放至凝固。B．3培养基平皿培养及保存制备好的培养基平皿宜在2℃~8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。1）如果用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。[详细]

  2018-09-28 10:00

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  常用培养基制备、灭菌与消毒　　制备、灭菌与消毒：　　一、实验目的　　了解培养基的配制原理;掌握配制培养基的一般方法和步骤;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤CJ的操作方法。　　二、实验原理　　培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。　　牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用Z广泛和Z普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的Z基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。　　干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。　　三、试剂与器材　　1.器材　　试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。　　2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂　　四、实验内容　　1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查　　2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物　　3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查　　4.过滤CJ：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌　　五、关键步骤及注意事项　　1.要严格按配方配制。　　2.调pH不要过头。　　3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70C以下放物、取物。　　4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。　　5.过滤CJ要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。[详细]

  2018-09-27 10:00

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