（Digoxin） 检测试剂盒

本文由 上海瓦兰生物科技有限公司 整理汇编

2018-09-22 10:00 286阅读次数

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• （Digoxin） 检测试剂盒

  www.biokanu.com(Digoxin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。1使用目的：本试剂盒用于血液、血清、尿液等样本中(Digoxin)残留的定量检测。2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有(Digoxin)偶联抗原，加入(Digoxin)标准品或样品，游离(Digoxin)与微孔条上预包被的(Digoxin)偶联抗原互相竞争(Digoxin)抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中(Digoxin)含量成反比，通过标准曲线计算样品中(Digoxin)的含量。3试剂盒组成3.1预包被的(Digoxin)偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。3.2(Digoxin)标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/L,0.01ug/L,0.03ug/L,0.15ug/L,0.45ug/L,1.35ug/L3.3抗(Digoxin)抗体酶结合物：1瓶（6ml）。3.4显色液A：1瓶（6ml）。3.5显色液B：1瓶（6ml）。3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9说明书一份。4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。4.1.2粉碎机。4.1.3量筒。4.1.4振荡器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相当的滤纸。4.1.7微量移液器。4.2试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。4.2.2甲醇。5贮存5.1试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2未用完的微孔板应该密封干燥保存6注意事项6.1使用试剂盒前请仔细阅读说明书。6.2不要使用过期试剂盒。6.3试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。6.4标准品中含有(Digoxin)，使用时应特别注意，操作时应带手套。6.5终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。6.6不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。6.7不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。6.8稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果6.9混合试剂时应避免起泡。7工作液准备7.1(Digoxin)标准品溶液：0ug/L,0.01ug/L,0.03ug/L,0.15ug/L,0.45ug/L,1.35ug/L7.2浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用7.3样本稀释液：备用7.3显色剂：已备用，避免光线直照7.4反应终止液：已备用8样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）8.1取10g粉碎的样品，加20ml70%甲醇溶液8.2QL振荡3分钟8.3用WhatmanNo1滤纸过滤8.4取100l处理后的样品，加入400l样本稀释液8.5取50μl稀释液进行分析（稀释倍数10）动物组织前处理8.6准确称取1±0.05g匀浆后的组织样品到50ml的聚苯乙烯离心管中；加入3ml乙腈--丙酮提取溶液，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮气流下吹干8.8加入2mL1×样品稀释液Ⅰ,750rpm涡旋20s8.9取100ml用于分析饲料前处理方法8.10准确称取1±0.05g粉碎饲料样品到50ml的聚苯乙烯离心管中；加入4ml乙腈，1ml丙酮，2000rpm剧烈震荡20s后4000r/min以上离心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮气流下吹干8.12加入1mL1×样品稀释液Ⅰ,涡旋20s，取出100ml加到900ml1×样品稀释液Ⅰ，混匀后取100ml用于分析牛奶前处理方法8.13取1ml牛奶样品到2ml离心管中；用1×样品稀释液Ⅱ稀释30倍，混匀后取100ml用于分析奶粉前处理方法8.14准确称取0.3g奶粉样品到7ml的聚苯乙烯离心管中；加入2ml1×样品稀释液Ⅲ，2ml正己烷，震荡混匀8.154000r/min以上离心5min，去除有机层和中间层，取下层溶液100ml到300ml1×样品稀释液Ⅲ8.16混匀后取100ml用于分析9酶免分析步骤9.1实验须知9.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保证回温充分，否则影响检测的极ng确度和准确度。9.1.2使用后请立即将试剂放回2~8℃保存9.1.3请不要改变分析程序9.1.4请使用极ng确的微量移液器9.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序9.1.6ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作9.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样9.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面9.2分析步骤9.2.1预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测9.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ug/L标准品溶液9.2.5在各标准孔中加入50μl的标准品溶液9.2.6在各样品孔中加入50l样品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗(Digoxin)抗体酶结合物9.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。9.337℃温浴30min（温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）9.3.1甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，Z后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。9.4反应9.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50l显色液A，再加50l显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀9.4.237℃温浴10min9.4.3每孔中加入50l终止液，混匀9.4.4在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。10结果计算10.1定量分析10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以**个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以1**%，即百分吸光度值。B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B00ug/L标准溶液的平均吸光度值10.1.2以(Digoxin)浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为(Digoxin)浓度的对数值，求得反对数即为测定液中(Digoxin)浓度C（ug/L）10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。10.2半定量测定10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。11特异性物质交叉反应(Digoxin)1**%12试剂盒参数本试剂盒检测下限为0.01ug/LB0吸光度**值应大于1.0试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。13标准曲线模式（仅供参考）试剂盒提供的标准曲线范围为0.01ug/L~1.35ug/L。14分析限制本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。[详细]

  2018-09-22 10:00

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  2012-08-24 00:00

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  2012-08-24 00:00

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  订货号：10207748035产品名称：淀粉（Starch）产品英文名称：Starch包装：Ca.27tests产品介绍：请下载产品说明：Starch（用于检测食品中的淀粉）[详细]

  2018-09-15 10:00

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  订货号：10139050035产品名称：胆固醇（Cholesterol）产品英文名称：Cholesterol包装：Ca.31tests产品介绍：请下载详细资料产品说明：Cholesterol（用于检测食品中的胆固醇）[详细]

  2018-09-15 10:00

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  2024-09-15 01:56

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  2024-09-29 05:31

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  订货号：10176290035产品名称：乙醇检测试剂盒（Ethanol）产品英文名称：Ethanol包装：Ca.33tests产品介绍：欢迎下载产品说明：Ethanol（用于检测食品中的乙醇）[详细]

  2024-10-02 18:27

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  2015-03-17 00:00

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  2015-03-06 00:00

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  2015-03-16 00:00

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  2012-08-27 00:00

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  2012-08-24 00:00

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  2012-08-24 00:00

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  2015-07-28 00:00

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• 内毒素检测试剂盒说明

  显色基质鲎试剂盒使用说明书（终点显色法，含偶氮化试剂）【用途】显色基质鲎试剂（ChromogenicEnd-pointTachypleusAmebocyteLysate,CETAL）用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax=545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。【检测限】按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml两个区间（反应时间T1和T2见出厂检验报告）。【试剂盒组成】细菌内毒素工作品，2支鲎试剂，1.7ml/支，2支显色基质，1.7ml/支，2支偶氮化试剂1，10ml/支，2支偶氮化试剂2，10ml/支，2支偶氮化试剂3，10ml/支，2支HCl（反应终止剂），50ml/瓶，1瓶细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，2瓶【贮存】阴凉处,**2-8℃,避光贮存。【用法】1.材料和设备1.1试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2、偶氮化试剂3、HCl（反应终止剂）、细菌内毒素检查用水。1.2器材旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的（我公司提供无热原耗材）。玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。2.供试品的贮存与预处理备注：若供试品为血液类，请参照配套血液相关处理试剂使用说明书。2.1供试品的pH值应在6-8之间，若超出此范围，需用无热原缓冲液、0.1N氢氧化钠或0.1N盐酸调节。2.2若供试品中可能存在鲎实验的干扰物质，处理参见【供试品的干扰试验】。2.3若供试品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖会产生G因子旁路反应，干扰内毒素检测），需选用特异性鲎试剂（我公司提供）。2.4若供试品为一些KJ素如头孢类KJ素和磺胺制剂会对偶氮染色剂产生偶联反应而干扰偶氮化显色，需要选用不含偶氮化试剂的试剂盒（我公司提供）。2.5若供试品的本底吸光度值大于0.5,必须对供试品进行稀释后再检测。2.6若供试品颜色较深（例如溶血），或在酸性条件下颜色加深（例如一些组织培养介质）,必须设置供试品空白管以扣除供试品自身的颜色本底。供试品空白管不加入鲎试剂，以等体积鲎试剂的溶剂（该处为细菌内毒素检查用水）代替。其余操作同供试品管。3.实验操作3.1细菌内毒素标准溶液配制标准曲线所采用的内毒素浓度可以为0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀释方法如下（以0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml为例）：取细菌内毒素工作品1支，按细菌内毒素工作品使用说明书稀释为10EU/ml的内毒素溶液，再稀释为1.0EU/ml的内毒素溶液，以1.0EU/ml的内毒素溶液为母液按下表稀释成0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml的浓度梯度。配制好的内毒素标准溶液应在4小时内用完。表1内毒素标准溶液配制内毒素浓度（EU/ml）10.50.250.1加细菌内毒素检查用水（ml）00.50.750.9加1EU/ml内毒素溶液（ml）10.50.250.1鲎试剂：按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解,注意不要用旋涡混匀仪激烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内用完。显色基质：按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻振摇使显色基质完全溶解。显色基质溶液可在无污染的条件下于4C贮存8小时以内。偶氮化试剂1：按标示量加反应终止剂盐酸于偶氮化试剂1中，偶氮化试剂2：按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂2中，偶氮化试剂3：按标示量加细菌内毒素检查用水于偶氮化试剂3中，偶氮化试剂溶液可于4C贮存1周。3.4实验操作取无热原试管，加入100ml细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液，或供试品。再加入100ml鲎试剂溶液，混匀，37C温育T1分钟。温育结束，加入100ml显色基质溶液，混匀，37C温育T2分钟。温育结束，加入500ml偶氮化试剂1溶液，混匀，加入500ml偶氮化试剂2溶液，混匀加入500ml偶氮化试剂3溶液，混匀，静置5分钟，于545nm波长处读取吸光度值。（见表２）表2实验操作阴性对照内毒素标准供试品加细菌内毒素检查用水（ml）100加内毒素标准溶液（ml）100加供试品（ml）100加鲎试剂（ml）100100100混匀，37C温育T1分钟加显色基质溶液（ml）100100100混匀，37C温育T2分钟加偶氮化试剂1溶液（ml）5005005004.数据处理建立标准曲线：Y=bX+a，其中Y为545nm处吸光度值，X为内毒素的浓度，b为直线斜率，a为Y轴截距。当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：1.标准曲线的相关系数r≥0.980，2.标准曲线Zdi点的Y值大于阴性对照的Y值，3.供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。【供试品的干扰试验】供试品的干扰试验详见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“光度测定法干扰试验”。当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须进行干扰试验,步骤如下:1选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度（设为λm），作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度，配制含λm内毒素的供试品阳性对照，测量出该溶液的内毒素浓度,称为Cs；2测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度,称为Ct；3计算该试验条件下的回收率R＝（CsCt）/λm×1**%4当R在50%～200%之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用。5当R在50%～200%之外，需对供试品进行系列稀释（稀释倍数不得超过Zda有效稀释倍数MVD）或进行其它处理消除干扰,每一稀释溶液都重复步骤1-3,直到内毒素的回收率R在50%～200%之间。选择回收率RZ接近1**%的稀释倍数进行内毒素检测。[详细]

  2018-09-18 10:00

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• ELISA分析检测试剂盒

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内皮素（ET）水平。用纯化的大鼠内皮素（ET）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内皮素（ET），再与HRP标记的内皮素（ET）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的内皮素（ET）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠内皮素（ET）浓度。ELISA分析检测试剂盒标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。ELISA分析检测试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120μg/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液60μg/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液30μg/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液15μg/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液7.5μg/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。ELISA分析检测试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-27 10:00

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