实时荧光定量pcr仪的计算原理

Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

技术原理：

在PCR反应体系中，将荧光基因加入，利用荧光信号累积对整个PCR进程进行实时监测，Z后通过标准曲线定量分析未知模板的方法，被称为real-time Q-PCR技术。在 real-time 技术的发展过程中，起关键作用的是两个重要的发现：

1.90年代早期，发现了TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性，其能够将特异性荧光记探针降解，所以，具备了对PCR产物间接的检可能性。

2.在这之后，在一密闭的反应管中，可以通过对荧光双标记探针的运用对反应全过程实时地监测。real-time Q-PCR方法由于这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展在在研究工作中得到了广泛地运用。

PCR反应过程中，产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，Z终PCR反应进入平台期，不再以指数方式生成模板。

在传统的PCR中，PCR反应的Z终扩增产物是通过凝胶电泳分离并且通过荧光染色来检测的。所以对PCR产物定量的终点法存在不可靠之处。

在real-time Q-PCR中，整个PCR反应扩增过程，对扩增的相关的荧光信号进行了实时的监测和连续地分析。随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期，不能明显地区分产生荧光的水平不能与背景，而后荧光的产生进入指数期、线性期和Z终的平台期，PCR产物的量可以在PCR反应处于指数期的某一点上的时候进行检测并且对模板Z初的含量进行推断。

相关应用：

应用行业

各级各类YL机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。

由于qPCR是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。

科学研究

医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。

食品安全

食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。

动物疾病检测

禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。

临床疾病诊断

各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和LX评价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。