实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。下面就让小编为你具体介绍一下。

实时荧光定量PCR

传统定量只能终点检测的局限通过实时荧光定量PCR技术有效地解决了。每一轮循环均可检测一次荧光信号的强度被实现了，并且在电脑软件之中记录，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因而，实时荧光定量PCR之所以无需内标是因为其建立在两个基础之上的：

1）Ct值与起始模板的线性关系

因为Ct值与起始模板的对数存在线性关系，，能够利用标准曲线定量测定未知样品。所以，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。

和内标法相比，外标准曲线的定量方法更科学，更准确、更值得信赖。迄今为止，已得到全世界的公认，定量Z准确，重现性Z好的定量方法就是外标准曲线的实时荧光定量PCR。

2）Ct值的重现性

当PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，真正的指数扩增期（对数期）刚刚进入，这个时候，误差尚未放大，仍很微小，所以

Ct值的重现性极好，也就是说，无论是同一时间不同管内扩增，还是同一模板不同时间扩增，得到的都是恒定的Ct值。

实时荧光定量PCR在基因表达研究、转基因研究，药物LX考核、病原体检测等诸多领域得到广泛地应用。

实时荧光定量PCR的定量方法

在Real-timePCR中，模板定量有相对定量和定量两种策略。

优势

Ct值（限制点的循环数）指的是样品到达域值水平所经历的循环数。为了使获得的数据Z准确，可重复，域值应设定在使指数期的扩增效率为Zda。若标有相应浓度的标准品同时扩增，一条可以用来计算未知样品的浓度的标准曲线将由线性回归分析产生。

在“Torsch”诊断中的应用

在妊娠早期（1-3个月），胎儿容易因为感染某些病原微生物而畸形，有弓体（TOX）、风疹病毒（RV）、单纯疱疹病毒（HSV）、沙眼衣原体（CT）、及巨细胞（HCMV）是这些病原体中Z常见的。对这几种病原体的检测按照它们的英文词首简称为Torsch试验。