细胞培养箱消毒灭菌

　　细胞培养箱是开展免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备，细胞培养箱广泛应用于细胞、组织培养和某些特殊微生物的培养，常见于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、各种物理、化学因素的致癌或毒理效应、抗原的研究和生产、培养杂交瘤细胞生产抗体、体外授精(IVF)、干细胞、组织工程、药物筛选等研究领域。

细胞培养箱的污染来源

　　对于细胞来说，非常理想的培养环境同样也适合这些污染物的生存，培养箱本身是不会辨别的，而细胞培养中大部分时间里细胞都是位于培养箱内，因此箱体内能否抑jun或灭菌非常关键!

　　细胞培养箱中的主要污染源：细菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原体、非同种细胞。

　　支原体：支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞已经受到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，yi制细胞生长等，往往被大多数实验者忽视。

　　细菌：细菌污染后，培养基1-2天就会变色，对细胞生长影响明显，应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离，灭菌后丢弃，还要用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台。

　　病毒：由于病毒寄生生存，爆发后尽快和正常细胞隔离，丢弃处理，相对来说容易处理，对操作者威胁较大;尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

　　真菌(霉菌和酵母菌)：真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了;目前没有好的yi制方法，包括现在常用的两性霉素，一旦污染容易反复爆发，尤其孢子很难杀灭。

　　非同种细胞：即细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。

细胞培养箱的消毒灭菌

　　细胞培养箱的灭菌和消毒方法有化学消毒、干热灭菌以及湿热灭菌。

　　化学消毒法：

　　针对细胞培养箱的灭菌和消毒，采用化学消毒只能是易挥发没有残留的普通试剂(如酒精)，而酒精的只对部分细菌繁殖体等微生物有去除效果，只能作为一种辅助消毒灭菌方法，对于孢子及病毒起不到杀灭的作用;如果采用毒性较大的化学试剂(如双氧水、环氧乙烷等)，在消毒处理后将会产生残留，对细胞培养箱的培养环境带来化学污染，影响后续的培养。

　　干热法灭菌：

　　干热法灭菌是指将细胞培养箱的箱体内加热到120摄氏度以上的高温，湿度为20%以内，持续一定的时间(2小时)，通过高温是蛋白质及核算变性失活，达到杀灭的目的;但干热对于箱体内其他部件要求能耐受高温，对于传感器等部件必须取出，有可能带来二次污染，并且有些真菌芽孢，由于厚厚的细胞壁保护，能够抵抗一定的高温，灭菌不能彻底。

　　湿热灭菌：

　　湿热灭菌是指在高温的同时保持细胞培养箱箱体内饱和湿度，可以降低加热温度，同时达到彻底灭菌效果。

　　湿热灭菌相比于干热灭菌，主要区别是：

　　①湿热灭菌中的菌体吸收水分，蛋白质含水量高，所需凝固温度降低，易凝固变性;

　　②高温水蒸汽对蛋白质有高度的穿透力，从而加速蛋白质变性而迅速死亡;

　　③三是湿热的蒸汽有潜热存在，能迅速提高被灭菌体的温度，从而增加灭菌效力。

　　由此可见，细胞培养箱采用湿热灭菌是一种可行且效果的灭菌方法，能彻底消灭细菌、真菌、孢子、病毒等微生物，防止环境对箱体内污染和不同培养对象间的交叉污染;同时相比于化学消毒方式灭菌效果更为彻底、且没有残留;相比于干热灭菌，可以降低灭菌的温度，加大灭菌的彻底性，且没有二次污染。

细胞培养室的消毒清理

　　1、细胞培养室要制定合理的卫生制度安排，一般每周打扫次，打扫范围包括：特殊角落仪器设备阻挡处尘埃的清除;

　　2、对可触及到的细胞培养箱表面及房间装修面进行清洁水稀释的消毒液等清洁;

　　3、清洁完后进行抽湿干燥、紫外消毒处理等。

　　目前对培养室无菌环境的维持主要以紫外线杀菌消毒为主。细菌经紫外线照射一定时间后，其链上相邻的个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，使分子空间构型发生改变，从而干扰细菌的复制和转录，导致细菌死亡。