PCR阴性

对特定的DNA片段起到放大扩增作用的一种分子生物学技术，被称为聚合酶链式反应。其可以被当作生物体外的特殊DNA复制，能够大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出设想，1985年Mullis发明了聚合酶链反应。下面就让小编带你了解一下PCR反应阴性的原因。

值得注意的是，有有时候会忘记将Taq酶或溴乙锭加入。

物理原因：

对于PCR扩增而言，变性可谓非常的重要，如果变性的时间很短并且变性的温度很低，那么很有可能导致假阴性的出现。退火事有过低的温度，可能会造成非特异性扩增，从而使得特异性扩增效率降低。如果退火温度过高，那么会对引物与模板的结合产生影响从而使得PCR扩增效率降低。有些时候，扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度也非常有必要使用标准的温度计检测一下，因为这些也很有可能造成PCR失败。

反应体积的改变：

20ul、30ul、50ul、或100ul为进行PCR扩增时常用的体积。科研和临床检测的不同目的决定了应用多大体积进行PCR扩增。如果在做小体积如20ul后，又做大体积，必须先对条件进行摸索，否则非常容易失败。

Mg2+浓度：

PCR扩增效率受到Mg2+离子浓度非常大的影响，如果Mg2+浓度过高，就会使得PCR扩增的特异性降低，如果Mg2+浓度过低，那么可能会对PCR扩增产量产生影响甚至会导致PCR扩增失败，扩增条带没有出现。

引物：

PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散通常是由引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称造成的。若引物合成质量出现问题，两条引物一条浓度低，另外一条浓度高，导致扩增效率低下以及扩增不均匀，那么有如下方法。

1.对一个好的引物合成单位进行选定。

2.引物的浓度不但要注意OD值而且要注意引物原液做琼脂糖凝胶电泳，必须要出现引物条带，并且两引物带需要有大体相同的亮度，如果一条引物没有条带，另外一条引物有条带，那么这个时候做PCR有失败的可能性。如果一条引物亮度低，另外一条引物亮度高，那么在稀释引物时需要对其浓度进行平衡。

3.当对引物进行保存时，应该高浓度少量分装保存，避免长期放冰箱冷藏部分或者多次冻融，造成引物变质，降解失效。

4.引物没有得到合理的设计，若引物没有足够的长度，那么二聚体等会在引物之间形成。

靶序列变异：

如果靶序列发生突变或缺失，那么会对引物与模板特异性结合产生影响，导致靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，从而造成PCR扩增失败